[发明专利]用于检测H5、H7和H9以及9个NA亚型AIV的引物组合及其应用

摘要

本发明公开了一种用于检测H5、H7和H9以及9个NA亚型AIV的引物组合及其应用。本发明保护一种引物组合，包括13个引物对(26种引物)，26种引物依次如序列表的序列1至序列26所示。应用本发明提供的引物组合配套GeXP检测方法鉴定H5、H7和N9亚型组合9个NA亚型，具有高通量、快速、省时省力的优点，为快速鉴别H5、H7和N9亚型组合9个不同的NA亚型AIV提供了有效方法，应用前景广阔。

主权项

1.引物组合，包括如下13个引物对：引物对AIV‑M由正向引物和反向引物组成，正向引物为(a1)、(a2)、(a3)或(a4)，反向引物为(b1)、(b2)、(b3)或(b4)；(a1)序列表的序列1所示；(a2)序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(a3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a3)和/或(a4)中，基因特异性引物如序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(b1)序列表的序列2所示；(b2)序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；(b3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b3)和/或(b4)中，基因特异性引物如序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；引物对H5由正向引物和反向引物组成，正向引物为(c1)、(c2)、(c3)或(c4)，反向引物为(d1)、(d2)、(d3)或(d4)；(c1)序列表的序列3所示；(c2)序列表的序列3第19至38位核苷酸所示；(c3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(c4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(c3)和/或(c4)中，基因特异性引物如序列表的序列3第19至38位核苷酸所示；(d1)序列表的序列4所示；(d2)序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；(d3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(d4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(d3)和/或(d4)中，基因特异性引物如序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；引物对H7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(e1)、(e2)、(e3)或(e4)，反向引物为(f1)、(f2)、(f3)或(f4)；(e1)序列表的序列5所示；(e2)序列表的序列5第19至41位核苷酸所示；(e3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e3)和/或(e4)中，基因特异性引物如序列表的序列5第19至41位核苷酸所示；(f1)序列表的序列6所示；(f2)序列表的序列6第20至39位核苷酸所示；(f3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f3)和/或(f4)中，基因特异性引物如序列表的序列6第20至39位核苷酸所示；引物对H9由正向引物和反向引物组成，正向引物为(g1)、(g2)、(g3)或(g4)，反向引物为(h1)、(h2)、(h3)或(h4)；(g1)序列表的序列7所示；(g2)序列表的序列7第19至37位核苷酸所示；(g3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(g4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(g3)和/或(g4)中，基因特异性引物如序列表的序列7第19至37位核苷酸所示；(h1)序列表的序列8所示；(h2)序列表的序列8第20至38位核苷酸所示；(h3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(h4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(h3)和/或(h4)中，基因特异性引物如序列表的序列8第20至38位核苷酸所示；引物对N1由正向引物和反向引物组成，正向引物为(i1)、(i2)、(i3)或(i4)，反向引物为(j1)、(j2)、(j3)或(j4)；(i1)序列表的序列9所示；(i2)序列表的序列9第19至38位核苷酸所示；(i3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(i4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(i3)和/或(i4)中，基因特异性引物如序列表的序列9第19至38位核苷酸所示；(j1)序列表的序列10所示；(j2)序列表的序列10第20至38位核苷酸所示；(j3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(j4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(j3)和/或(j4)中，基因特异性引物如序列表的序列10第20至38位核苷酸所示；引物对N2由正向引物和反向引物组成，正向引物为(k1)、(k2)、(k3)或(k4)，反向引物为(l1)、(l2)、(l3)或(l4)；(k1)序列表的序列11所示；(k2)序列表的序列11第19至35位核苷酸所示；(k3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k3)和/或(k4)中，基因特异性引物如序列表的序列11第19至35位核苷酸所示；(l1)序列表的序列12所示；(l2)序列表的序列12第20至36位核苷酸所示；(l3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l3)和/或(l4)中，基因特异性引物如序列表的序列12第20至36位核苷酸所示；引物对N3由正向引物和反向引物组成，正向引物为(m1)、(m2)、(m3)或(m4)，反向引物为(n1)、(n2)、(n3)或(n4)；(m1)序列表的序列13所示；(m2)序列表的序列13第19至41位核苷酸所示；(m3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m3)和/或(m4)中，基因特异性引物如序列表的序列13第19至41位核苷酸所示；(n1)序列表的序列14所示；(n2)序列表的序列14第20至41位核苷酸所示；(n3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n3)和/或(n4)中，基因特异性引物如序列表的序列14第20至41位核苷酸所示；引物对N4由正向引物和反向引物组成，正向引物为(o1)、(o2)、(o3)或(o4)，反向引物为(p1)、(p2)、(p3)或(p4)；(o1)序列表的序列15所示；(o2)序列表的序列15第19至40位核苷酸所示；(o3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o3)和/或(o4)中，基因特异性引物如序列表的序列15第19至40位核苷酸所示；(p1)序列表的序列16所示；(p2)序列表的序列16第20至39位核苷酸所示；(p3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p3)和/或(p4)中，基因特异性引物如序列表的序列16第20至39位核苷酸所示；引物对N5由正向引物和反向引物组成，正向引物为(q1)、(q2)、(q3)或(q4)，反向引物为(r1)、(r2)、(r3)或(r4)；(q1)序列表的序列17所示；(q2)序列表的序列17第19至38位核苷酸所示；(q3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(q4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(q3)和/或(q4)中，基因特异性引物如序列表的序列17第19至38位核苷酸所示；(r1)序列表的序列18所示；(r2)序列表的序列18第20至40位核苷酸所示；(r3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(r4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(r3)和/或(r4)中，基因特异性引物如序列表的序列18第20至40位核苷酸所示；引物对N6由正向引物和反向引物组成，正向引物为(s1)、(s2)、(s3)或(s4)，反向引物为(t1)、(t2)、(t3)或(t4)；(s1)序列表的序列19所示；(s2)序列表的序列19第19至43位核苷酸所示；(s3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(s4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(s3)和/或(s4)中，基因特异性引物如序列表的序列19第19至43位核苷酸所示；(t1)序列表的序列20所示；(t2)序列表的序列20第20至44位核苷酸所示；(t3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(t4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(t3)和/或(t4)中，基因特异性引物如序列表的序列20第20至44位核苷酸所示；引物对N7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(u1)、(u2)、(u3)或(u4)，反向引物为(v1)、(v2)、(v3)或(v4)；(u1)序列表的序列21所示；(u2)序列表的序列21第19至38位核苷酸所示；(u3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(u4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(u3)和/或(u4)中，基因特异性引物如序列表的序列21第19至38位核苷酸所示；(v1)序列表的序列22所示；(v2)序列表的序列22第20至39位核苷酸所示；(v3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(v4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(v3)和/或(v4)中，基因特异性引物如序列表的序列22第20至39位核苷酸所示；引物对N8由正向引物和反向引物组成，正向引物为(w1)、(w2)、(w3)或(w4)，反向引物为(x1)、(x2)、(x3)或(x4)；(w1)序列表的序列23所示；(w2)序列表的序列23第19至38位核苷酸所示；(w3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(w4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(w3)和/或(w4)中，基因特异性引物如序列表的序列23第19至38位核苷酸所示；(x1)序列表的序列24所示；(x2)序列表的序列24第20至40位核苷酸所示；(x3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(x4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(x3)和/或(x4)中，基因特异性引物如序列表的序列24第20至40位核苷酸所示；引物对N9由正向引物和反向引物组成，正向引物为(y1)、(y2)、(y3)或(y4)，反向引物为(z1)、(z2)、(z3)或(z4)；(y1)序列表的序列25所示；(y2)序列表的序列25第19至39位核苷酸所示；(y3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(y4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(y3)和/或(y4)中，基因特异性引物如序列表的序列25第19至39位核苷酸所示；(z1)序列表的序列26所示；(z2)序列表的序列26第20至39位核苷酸所示；(z3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(z4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(z3)和/或(z4)中，基因特异性引物如序列表的序列26第20至39位核苷酸所示。