[发明专利]一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法

摘要

本发明涉及一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，包括外植体的取材、愈伤组织的诱导、愈伤组织的继代培养、胚性愈伤组织的诱导、胚性细胞的成熟胚诱导以及体胚苗的诱导等步骤。本发明根据百子莲胚性启动与维持的激素合成代谢、信号转导特点，利用小花梗作为外植体诱导愈伤组织，通过愈伤组织继代和诱导，获得胚性愈伤组织，在体胚诱导期改变糖和激素配比，调控细胞极性，以诱导数量较多、发育同步的体细胞胚胎，并在已诱导的体细胞胚胎发育过程中，通过优化诱导培养基方案，调节激素的合成与信号，以获得形态完整，长势良好，数量较多的体胚苗。解决了百子莲胚性细胞在频繁继代过程中产生的成熟胚诱导数量少、胚胎败育、体胚苗数量低的问题。

主权项

1.一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的取材：5～6月份，取4～5年生百子莲未开裂的小花苞，在无菌操作台上进行消毒处理，然后用ddH2O冲洗3～5次，用无菌滤纸吸干小花苞表面的水分，然后切取小花梗外植体，将小花梗外植体切成0.7～1.0cm的小段；(2)愈伤组织的诱导：取0.7～1.0cm的小花梗外植体小段，平放状态接种于愈伤组织诱导培养基中，22～28℃暗培养12～18d，可见白色半透明的愈伤组织生成，30d天后进行愈伤组织的继代培养；(3)愈伤组织的继代培养：取带有残留小花梗组织的愈伤组织细胞团，放置在愈伤组织继代培养基上，22～28℃暗培养，以60d为一个继代周期，继代培养2次，愈伤组织逐渐转变为微黄色；(4)胚性愈伤组织的诱导：取不含残留小花梗组织的愈伤组织，放置在胚性愈伤组织诱导培养基上，22～28℃暗培养，60d后，微黄色愈伤组织表面出现单细胞起源的胚性愈伤组织；(5)胚性细胞的成熟胚诱导：取0.5g胚性愈伤组织，放置在成熟胚诱导培养基上，22～28℃光照培养，得到成熟胚；(6)体胚苗的诱导：取0.25g成熟胚组织，放置在体胚苗诱导培养基上，22～28℃光照培养，30d后得到带有根系的体胚苗。