[发明专利]一种SD大鼠星形胶质细胞培养方法

摘要

发明提供了一种SD大鼠星形胶质细胞培养方法，本方法操作简单，具有较高的可重复性；通过使用专用培养基，星形胶质细胞生产效果好，保证了星形胶质细胞的纯度。本发明能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的SD大鼠星形胶质细胞，便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究星形胶质细胞的生理功能。

主权项

1.一种SD大鼠星形胶质细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：DMEM/F12完全培养基配制：超净工作台内取88ml DMEM/F12基础培养基于无菌、干净的瓶内，加入10ml FBS、1ml青链霉素双抗、1ml谷氨酰胺，0.22um过滤器过滤后转移至新的瓶内，盖紧瓶盖；瓶子上标明培养基名称、配制日期、配制人后缠紧封口膜，4度冰箱保存备用；星形胶质细胞培养：步骤A：取刚出生1天的新生SD大鼠4只，体积百分比为75%的乙醇浸泡淹死；步骤B：取四个10cm培养皿，每个皿内加入约10ml解剖液；步骤C：将步骤A中得到的新生SD大鼠放入第一个培养皿中，让解剖液充分浸泡新生SD大鼠，将新生SD大鼠头部取下；步骤D：将步骤C中取下的头部转移到第二个盛有解剖液的培养皿内，除去头部皮肤；步骤E：将步骤D中除去头部皮肤的大鼠头部使用显微镊撕开颅骨，撕开颅骨后，用眼科镊固定住头部，用显微镊撕掉颅骨，暴露出整个大脑；步骤F：将步骤E中取得的大脑转移至第三个盛有解剖液的培养皿内，体式显微镜下找到脑膜，用显微弯镊固定住脑部，用显微直镊撕除脑膜；用显微剪轻轻剪下大脑皮层组织，取材厚度0.5mm，放入第四个盛有解剖液的培养皿内，转移至超净工作台内；步骤G：将取下来的大脑皮层组织在解剖液内剪成约0.5mm³大小，用巴氏吸管将组织块连同解剖液转移至15ml离心管内；1000rmp/min离心3min，弃上清；用2ml DMEM/F12完全培养基重悬组织块，巴氏吸管轻轻吹打成单细胞悬液；步骤H：在六孔板每孔接种10⁶个细胞；接种细胞后培养箱内培养24h，24h后换液除去未贴壁细胞，随后每2‑3天换液一次；接种24h后细胞开始贴壁，细胞梭型，透光性良好；72h时可见少数细胞长出伪足，但细胞形态未完全伸展开；7天时可见所有细胞都已经长出形态，部分细胞形态已经完全伸展开；10天时所有细胞形态已经完全伸展开，培养完成。