[发明专利]环介导恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法在审

专利信息
申请号: 201910021799.5 申请日: 2019-01-10
公开(公告)号: CN109609603A 公开(公告)日: 2019-04-12
发明(设计)人: 申阿东;王亚翠;王毅;焦伟伟;孙琳;李洁琼 申请(专利权)人: 首都医科大学附属北京儿童医院
主分类号: C12Q1/6844 分类号: C12Q1/6844;C12Q1/6804;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35
代理公司: 北京市众天律师事务所 11478 代理人: 李新军
地址: 100045 *** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明公开了一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测肺炎支原体特异基因P1的方法,本发明还提供了用于上述扩增的一组引物序列。所述方法在环介导恒温扩增中的内引物FIP的5’端标记荧光素(FITC),在环引物LF的5’端标记生物素(biotin),所述方法针对肺炎支原体特异基因P1的扩增产物能被纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异,灵敏度范围为60ng~600fg,并能准确地鉴别肺炎支原体,具有优异的特异性。
搜索关键词: 肺炎支原体 环介导恒温扩增 特异基因 纳米生物传感器 高分子纳米 可视化检测 内引物FIP 标记生物 标记荧光 传感检测 环引物LF 扩增产物 纳米生物 生物传感 引物序列 灵敏度 扩增 鉴别 敏感 检测
【主权项】:
1.一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法,所述方法包括以下步骤:(1)提取待检测样品的基因组;(2)提供如SEQ ID NO:1所示的外引物F3,SEQ ID NO:2所示的外引物B3,SEQ ID NO:3所示的内引物FIP,SEQ ID NO:4所示的内引物BIP,SEQ ID NO:5所示的环引物LF,SEQ ID NO:6所示的环引物LB,其中,选择以上任一引物的5’端标记半抗原,选择任意另一种引物的5’端标记生物素;(3)在链移位型聚合酶Bst 2.0、解链温度调节剂、引物、以及脱氧核糖核苷三磷酸存在下,使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA;(4)使用高分子纳米生物传感器检测步骤(3)的扩增产物。
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