[发明专利]从胎膜中分离培养间充质干细胞的方法在审
| 申请号： | 201910022926.3 | 申请日： | 2019-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN109504656A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 李荣;张小虎;海泉;陈静娴 | 申请（专利权）人： | 成都清科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229 | 代理人： | 郭艳艳 |
| 地址： | 610041 四川省成都市中国（四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种从胎膜中分离培养间充质干细胞的方法，包括以下步骤：分离组织、清洗、培养、传代、冻存。本发明提供了一种从胎膜中分离出羊膜、平滑绒毛膜和壁蜕膜三种组织来源的间充质干细胞的方法，改变了现有的取材部位，简化了分离工艺。本发明采用组织块贴壁法提取间充质干细胞，提取工艺简单快捷，无需引入外源酶，降低了外源物对细胞制剂质量产生影响的风险，且制备的细胞活性佳，纯度高，增殖能力更强。 | ||
| 搜索关键词： | 间充质干细胞 胎膜 分离培养 组织块贴壁法 传代 分离工艺 取材部位 细胞活性 细胞制剂 增殖能力 质量产生 绒毛膜 外源酶 平滑 冻存 蜕膜 外源 羊膜 制备 清洗 引入 | ||
【主权项】：
1.一种从胎膜中分离培养间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从胎膜组织中分离羊膜，平滑绒毛膜及壁蜕膜组织；(2)将步骤(1)所得的羊膜，平滑绒毛膜及壁蜕膜组织剪成组织块，加入组织清洗液进行清洗；(3)向清洗后的羊膜，平滑绒毛膜及壁蜕膜组织中分别加入无血清培养基进行重悬，然后接种至培养瓶中，在37℃，5％CO2，饱和湿度条件下进行培养；(4)每隔3‑4天更换一次培养基，直至P0代细胞融合度达到40‑50％或非P0代细胞融合度达到70‑85％；(5)对步骤(4)所得细胞进行消化，用无血清培养基终止消化，然后过100μm孔径的筛网去除组织，再对细胞悬液进行稀释，离心，重悬，接种至培养瓶中进行传代培养；(6)待传代后的细胞融合度达到70‑90％时，对步骤(5)所得细胞进行消化，收集细胞，加入PBS或0.9％氯化钠注射液，清洗细胞，然后将预冷的细胞冻存液加入细胞中，重悬细胞，然后分装，冻存。
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