[发明专利]一种CAGW多肽和TAT-NLS多肽修饰的载基因复合物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种CAGW多肽和TAT‑NLS多肽修饰的载基因复合物及其制备方法和应用，制备方法包括：制备聚乙二醇‑聚乙丙交酯共聚物mPEG‑b‑PLGA；制备聚乙丙交酯‑g‑聚乙烯亚胺共聚物PLGA‑g‑PEI；以PLGA‑g‑PEI为原料制备PLGA‑g‑PEI‑g‑CAGW共聚物；将PLGA‑g‑PEI‑g‑CAGW和mPEG‑b‑PLGA自组装制备靶向共聚胶束；向靶向共聚胶束中加入pDNA和TAT‑NLS，制得载基因复合物。本发明制得的载基因复合物对细胞有特异选择性，且具有很好的穿透能力和进核能力，且转染效率较高。

主权项

1.一种CAGW多肽和TAT‑NLS多肽修饰的载基因复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用mPEG作为大分子引发剂，辛酸亚锡作为催化剂，引发DL‑LA和GA开环共聚，制得聚乙二醇‑聚乙丙交酯共聚物mPEG‑b‑PLGA；(2)采用山梨醇作为引发剂，Sn(Oct)₂甲苯溶液作为催化剂，引发DL‑LA和GA开环共聚，制得聚乳酸‑羟基乙酸共聚物PLGA，然后将其羧基化后与PEI进行接枝反应，制得乳酸‑羟基乙酸‑g‑聚乙烯亚胺共聚物PLGA‑g‑PEI；(3)将PLGA‑g‑PEI和三乙胺溶解于DMF中，在0℃条件下，向其中滴加二烯丙基氨基甲酰氯溶液，反应过夜，最后过滤，浓缩，冷冻干燥得到接有双键的产物；(4)将接有双键的产物溶于DMSO中，随后依次加入2,2‑二甲氧基‑2‑苯基苯乙酮和CAGW的DMSO溶液，用紫外光照射10‑15min，最后过滤，透析，冷冻干燥，制得PLGA‑g‑PEI‑g‑CAGW共聚物；其中，CAGW是Cys‑Ala‑Gly‑Trp的简称；(5)将PLGA‑g‑PEI‑g‑CAGW和mPEG‑b‑PLGA分别溶于DMSO中，按照PLGA‑g‑PEI‑g‑CAGW和mPEG‑b‑PLGA质量比为2‑4:0.8‑1.2混合，然后加入pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液，搅拌，使其自组装形成PLGA‑g‑PEI‑g‑CAGW/mPEG‑b‑PLGA靶向共聚物胶束；(6)将步骤(5)所得共聚物胶束与pDNA溶液混匀，静置20‑40min，然后加入TAT‑NLS溶液，混匀，超声振荡10‑15s，最后静置20‑40min，制得CAGW多肽和TAT‑NLS多肽修饰的载基因复合物；其中，步骤(5)所得物与pDNA的质量比为2‑4:1‑3；TAT‑NLS上伯胺的摩尔数与pDNA上磷酸根的摩尔数比为0.1‑30:1。