[发明专利]一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法在审
| 申请号： | 201910040392.7 | 申请日： | 2019-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN109749936A | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 王陶;李文;杨英歌 | 申请（专利权）人： | 徐州工程学院 |
| 主分类号： | C12N1/02 | 分类号： | C12N1/02;C12N1/00;C12P7/42 |
| 代理公司： | 合肥律众知识产权代理有限公司 34147 | 代理人： | 白凯园 |
| 地址： | 221000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及化工技术领域，尤其是一种3‑羟基丙酸产生菌株的筛选方法，包括1）、富集土壤菌种：取5份1g土样于5个装有100mL富集培养基的250mL的三角瓶中,37℃摇床振荡培养，再180 r/min培养24 h；再分别取5mL富集培养液转接到各项碳源利用培养基中，250mL三角瓶装液量100mL,37℃摇床180r/min振荡培养1‑2d；2）、培养液的处理：取步骤1）中培养完成的培养液5mL,再以2000r/min离心5min取上清液,用强酸型732阳离子交换树脂进行处理,处理完成的样品待测；3）、检测目标菌株：先采用HPLC分析法再使用纸层析法检测样品中是否有目标菌株。本发明通过多种筛选碳源的测试，得出3‑羟基丙酸产生菌株的筛选方法，且反应体系简单，成本较低，可有助于相关研究工作的开展，具有十分重要的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 产生菌株 羟基丙酸 筛选 培养液 目标菌株 化工技术领域 富集培养基 富集培养液 检测样品 取上清液 碳源利用 摇床振荡 振荡培养 纸层析法 培养基 三角瓶 再使用 富集 强酸 土样 摇床 液量 菌种 测试 土壤 检测 应用 研究 | ||
【主权项】：
1.一种3‑羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：1）、富集土壤菌种：取5份1g土样于5个装有100mL富集培养基的250mL的三角瓶中, 37℃摇床振荡培养，再180 r/min培养24 h；再分别取5mL富集培养液转接到各项碳源利用培养基中，250mL三角瓶装液量100mL,37℃摇床180r/min振荡培养1‑2d；2）、培养液的处理：取步骤1）中培养完成的培养液5mL, 再以2000r/min离心5min取上清液,用强酸型732阳离子交换树脂进行处理,处理完成的样品待测；3）、检测目标菌株：先采用HPLC分析法再使用纸层析法检测样品中是否有目标菌株；4）、菌株的纯化：将步骤3）中检测出的样品得到的菌落放置在含有土霉素的无机盐固体培养基平板上划线，进行分离和纯化；此步骤重复2‑3次，直至得到单一菌落；然后将单菌落接入含有土霉素的无机盐液体培养基中,置于30‑38℃,150r/min震荡条件下,遮光培养36‑48h,得到单菌落培养液；5）、目标菌株的提取：将含有目标菌株的培养液粗品溶液与有机溶剂充分混合，通过蒸馏的方法得到含有3‑羟基丙酸的有机相或纯化的3‑羟基丙酸即可。
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