[发明专利]一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法

摘要

本发明公开了一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为头孢氨苄的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～50ug/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中头孢氨苄的浓度。

主权项

1.一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法，其特征在于：血浆样品经预处理后经高效液相色谱‑串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：(1)血浆样品预处理：以K₂EDTA为抗凝剂，以头孢氨苄‑d5为内标，于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL体积分数为98％的乙腈水溶液，混匀后加入5uL的0.04ug/uL的内标头孢氨苄‑d5溶液，混匀后加入1000uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液20uL至装有980uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为水：甲酸：1mol/L的醋酸铵按照体积比100：0.1：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；(2)试样测定：取10uL测试样品注入高效液相色谱‑串联质谱仪中，检测样品中头孢氨苄和内标头孢氨苄‑d5的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的头孢氨苄浓度；(3)液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX XDB‑C18，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积百分比为100/0.1；流动相B：乙腈/甲酸的体积百分比为100/0.1；洗液：乙腈/水的体积百分比为50/50；自动进样器温度为6℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；(4)质谱条件：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为14Psi，辅助加热气压力为14Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为27eV的头孢氨苄和头孢氨苄‑d5；碰撞室入口电压分别为10eV的头孢氨苄和头孢氨苄‑d5；碰撞电压分别为40eV的头孢氨苄和头孢氨苄‑d5；碰撞室出口电压分别为10eV的头孢氨苄和头孢氨苄‑d5；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z347.9→m/z106.1，其为头孢氨苄；和m/z352.9→m/z111.1，其为头孢氨苄‑d5。