[发明专利]一种利用南美白对虾血淋巴直接PCR的方法在审
| 申请号： | 201910059375.8 | 申请日： | 2019-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN109652405A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 陈义培;钱晓明;赵岩岩;闫兵兵;张琳琳 | 申请（专利权）人： | 南通龙洋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 226600 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用南美白对虾血淋巴直接PCR的方法，该方法由1.抗凝剂配制；2.血淋巴采集及预处理；3.PCR处理三部分组成，其特点为操作简单、成本低廉、安全无毒，该方法不仅省去了提取DNA的繁琐步骤而且不会造成对对虾亲本的伤害，符合现代生物学要求。 | ||
| 搜索关键词： | 血淋巴 南美白对虾 预处理 繁琐步骤 提取DNA 抗凝剂 亲本 对虾 生物学 配制 无毒 采集 伤害 安全 | ||
【主权项】：
1. 一种利用南美白对虾血淋巴直接PCR的方法，其特征在于，具体步骤如下 ：（1）抗凝剂配制分别称取EDTA2.92g、葡萄糖20.67 g、氯化钠19.25 g和柠檬酸钠8.22g，加入1L超纯水中，并充分混合溶解，混合溶解后用0.22um的细菌过滤器过滤备用；（2）血淋巴采集及预处理a.用规格为1ml注射器以45°角对准对虾第六体节与尾节连接处的基膜处，插入基膜4mm抽取20ul血淋巴；b.将抽取的20ul血淋巴注射入200ul PCR管中，并加上30ul步骤1中的抗凝剂吹打混匀，混匀后用掌上离心机进行快速离心处理，离心后加入70%乙醇轻微洗涤后，倒掉乙醇，加入10ul去离子水进行细胞重悬后备用；（3）PCR处理取1ul上述已处理好血淋巴样本作为PCR处理的模板，输入程序进行PCR处理，基因检测正反向引物：0.5ul（10um/ul），2x PCR MIX：10ul，ddH2O：8ul。
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