[发明专利]一种细胞外泌体提取分离的方法在审
| 申请号： | 201910070512.8 | 申请日： | 2019-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN109666622A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 丁润中 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海高等研究院;中国科学院大学 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248 | 代理人： | 吴肖敏 |
| 地址： | 201210 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种细胞外泌体提取分离的方法，包括以下操作步骤：将目标细胞放入选定的培养基内，细胞培养后72h收获，离心获取细胞培养基上清；将收获的细胞培养基上清使用低温离心机进行4℃，6000xg离心30min，离心完毕后将离心管内上清液转移至新管备用，沉淀丢弃；用一次性注射器吸取上清液，将上清液缓慢滴至规格为0.22um的细胞滤膜进行过滤；将细胞培养基放入超速离心机进行4℃，100000xg超速离心70min，离心完毕后去除上清保留沉淀部分；使用PBS缓冲液对沉淀进行清洗重悬，将液体再次放入超速离心机进行4℃，100000xg超速离心70min，离心完毕后小心吸出上清保留沉淀部分；使用PBS缓冲液重悬沉淀，即为所提取分离的外泌体产物。 | ||
| 搜索关键词： | 沉淀 细胞培养基 提取分离 上清液 超速离心机 超速离心 放入 重悬 细胞培养 一次性注射器 低温离心机 细胞 目标细胞 细胞滤膜 培养基 离心管 收获 保留 吸出 去除 备用 丢弃 过滤 清洗 | ||
【主权项】：
1.一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：包括以下操作步骤：S1：细胞培养基上清:将目标细胞放入选定的培养基内，细胞培养后72h收获，离心获取细胞培养基上清；S2：低速离心：将S1)中收获的细胞培养基上清使用低温离心机进行4℃，6000xg离心30min，离心完毕后将离心管内上清液转移至新管备用，沉淀丢弃；S3：滤膜过滤：用一次性注射器吸取将S2)中获得的上清液，将上清液缓慢滴至规格为0.22um的细胞滤膜进行过滤；S4：超速离心：将S3)中获得的细胞培养基放入超速离心机进行4℃，100000xg超速离心70min，离心完毕后去除上清保留沉淀部分；S5：清洗重悬；使用PBS缓冲液将S4)中获得的沉淀进行清洗重悬；S6：再次超速离心：将S5)中获得的液体再次放入超速离心机进行4℃，100000xg超速离心70min，离心完毕后小心吸出上清保留沉淀部分；S7：重悬沉淀：使用PBS缓冲液将S6)中获得的沉淀进行重悬，即为所提取分离的外泌体产物。
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