[发明专利]一种通用型猪蓝耳病毒三重巢式RT-PCR检测引物及方法在审
| 申请号： | 201910071660.1 | 申请日： | 2019-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN109762933A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 刘国平;晋钱钱;谢洪涛;常小云;胡利群 | 申请（专利权）人： | 长江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6848;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 武汉河山金堂专利事务所(普通合伙) 42212 | 代理人： | 胡清堂 |
| 地址： | 434023 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种用于检测猪蓝耳病毒的三重巢氏RT‑PCR引物及检测方法。所述巢式RT‑PCR引物是通过编码猪蓝耳病毒NSP2基因中碱基序列得到两对带有简并碱基的引物。所述检测方法为：提取待测样品的RNA，用两对引物进行两次PCR扩增，每次扩增产物分别进行电泳检测，依据目的基因片段大小来区分猪经典毒株、高致病性变异毒株和NADC‑30毒株。本发明提供的巢式RT‑PCR检测方法简便可靠、特异性强、灵敏度高、抗干扰性能好，克服了普通RT‑PCR检测灵敏度低，特异性差，需分别检测蓝耳病的经典毒株、高致病性变异株及NADC‑30等问题，而且成本低，检测周期短，具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 猪蓝耳病毒 检测 经典毒株 灵敏度 巢式 高致病性变异株 巢式RT-PCR 抗干扰性能 变异毒株 待测样品 电泳检测 高致病性 检测引物 碱基序列 简并碱基 扩增产物 两对引物 目的基因 特异性强 蓝耳病 通用型 毒株 引物 应用 | ||
【主权项】：
1.一种猪蓝耳病毒三重巢式RT‑PCR特异性引物，其特征在于：所述引物根据检测猪蓝耳病病毒NSP2基因中碱基序列得到两对带有简并碱基的引物，所述两对引物，分别为外侧引物PRRSV‑O‑F、PRRSV‑O‑R和内侧引物PRRSV‑I‑F、PRRSV‑I‑R，具体为：PRRSV‑O‑F：AATCTTGARGAATGCTTGGC(SEQ ID NO.1)；PRRSV‑O‑R：GCTGAGTAYTTTGGGCGTG(SEQ ID NO.2)；PRRSV‑I‑F：TTCTTTGATTGGRATGTTGTGC(SEQ ID NO.3)；PRRSV‑I‑R：CAAGGAGCTGCTTGAYGACAC(SEQ ID NO.4)；其中，简并碱基R表示A或G，简并碱基Y表示C或T。
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