[发明专利]以幼孢子囊群诱导的GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法

摘要

以幼孢子囊群诱导的GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法，包括外植体的选择及表面消毒、绿色球状体的诱导、绿色球状体的增殖、绿色球状体的分化、分化幼苗的壮苗及生根培养和华南紫萁组培苗的炼苗移栽等步骤，为通过组织培养途径繁育优质华南紫萁商品种苗提供了方法和途径，成功建立了以华南紫萁未完全展开叶上的幼孢子囊为外植体的组培繁殖方法，通过GGB途径诱导获得华南紫萁种苗，诱导时间短，诱导率高，且可周年生产，不受季节限制，解决了常规的孢子繁殖对环境要求高，且收集孢子受限等的问题。

主权项

1.以幼孢子囊群诱导的GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）外植体的选择及表面消毒：选取带有幼孢子囊群的华南紫萁未完全展开叶片，轻轻去除表面污垢，经流水冲洗干净后转入75％乙醇浸泡20 s，再用0.1％氯化汞振荡清洗2‑4 min，无菌水冲洗5‑7次，得华南紫萁无菌幼叶孢子囊外植体；（2）绿色球状体的诱导：将步骤（1）获得的华南紫萁无菌幼叶孢子囊外植体首尾切除，剪成2 cm小段，按照极性方向小心接种到GGB诱导培养基中；将接种好的材料置于光照培养架上进行培养；培养7‑10天，在培养基表面可以观察到很多从孢子囊群中散落下来的绿色孢子，继续培养2周，孢子逐渐膨大形成华南紫萁绿色球状体；（3）绿色球状体的增殖：步骤（2）中获得的绿色球状体分割成直径为3‑5 mm大小的绿球体小块，接种于绿色球状体增殖培养基上，培养时间为30天，得到增殖的华南紫萁绿色球状体；培养条件同步骤（2）；（4）绿色球状体的分化：将步骤（3）增殖得到的华南紫萁绿色球状体切割成5 mm大小的绿球体小块，接种于绿色球状体分化培养基上，培养时间为30天，得到分化幼苗；培养条件同步骤（2）；（5）分化幼苗的壮苗及生根培养：将步骤（4）获得的华南紫萁分化幼苗接种于壮苗及生根培养基上培养60天，每30天更换一次新的壮苗生根培养基，得到植株高度为2‑3 cm的生根组培苗；培养条件同步骤（2）；（6）华南紫萁组培苗的炼苗移栽：待步骤（5）所述组培苗高度达到3‑4 cm时，将其放在温度为20‑25°C、光照强度2000 lx，每日光照12 h的条件下进行炼苗；之后将组培苗小心取出，去除根部培养基，并用质量分数为0. 125%多菌灵溶液清洗根部，种植于育苗钵内，放置于温室大棚内，控制温度为20‑25°C，在自然光照下生长20天左右，即得到华南紫萁商品种苗。