[发明专利]一种粗勒草组织培养繁殖方法

摘要

一种粗勒草组织培养繁殖方法，包括外植体选取、外植体预处理、灭菌消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养。通过预处理形成结痂外植体，再进行外植体去痂、芽点轻划十字伤口处理，经诱导、增殖、壮苗和生根培养基培养，可使芽的诱导率达96％以上；芽的每个增殖周期的增值率达5倍，克服了常规繁殖系数低,规模化生产难的缺点。另外，该方法还可有效减低污染率。

主权项

1.一种粗勒草组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：外植体选取：在粗勒草生长旺盛期，选择长势良好、健壮、叶色美丽、株高25‑35cm的植株，剪取带有3‑5个节的当年生嫰茎为外植体；外植体预处理：将嫩茎清洗后，切去嫩茎上其他叶片，保留两片心叶；将嫩茎常温水培2‑3天至叶片切口结痂，得到预处理后的外植体；灭菌消毒：对叶片切口表面的结痂膜进行剥离，然后用75％酒精对嫩茎表面进行擦拭，再用0.01％HgCl2浸泡嫩茎10‑12分钟，最后用无菌水对嫩茎进行冲洗，得到灭菌消毒的外植体；诱导培养：将灭菌消毒的外植体剪成0.8‑1.0cm的茎段，每个茎段中有一个芽点，剥去茎段上芽点的表皮，然后在剥去表皮的芽点上划十字切口，切口深度为0.3‑0.5mm，最后按芽点向上的方向将茎段水平放置在诱导培养基上进行20‑30天的诱导培养，直至诱导出2‑3cm的幼芽；所述诱导培养基为MS培养基与2.0‑5.0mg/L的BA和0.2‑0.5mg/L的NAA混合配置；增殖培养：幼芽按节切段后，将芽段转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到分化出的从芽；所述增殖培养基为MS培养基与3.0‑4.0mg/L的BA和0.3‑0.5mg/L的NAA混合配置；壮苗培养：将分化出的丛芽切成单株接种到壮苗培养基上,待培养20‑30天，至幼苗株高2‑5cm且其上丛芽已生长；所述壮苗培养基为MS培养基与1.5‑2.0mg/L的BA和0.1‑0.2mg/L的NAA混合配置；生根培养：将幼苗株接种到生根培养基上，培养20‑30天，幼苗长出3条以上根系、幼苗株高至5‑7cm，得到组培苗；所述生根培养基为1/2MS培养基与0.3‑1.0mg/L的NAA和1g/L的活性炭混合配置。