[发明专利]一种地衣芽孢杆菌凝乳酶的制备方法

摘要

本发明提供了地衣芽孢杆菌凝乳酶的制备方法，采用地衣芽孢杆菌BL312制备，制备方法包括以下步骤：步骤1，将地衣芽孢杆菌BL312涂布、划线培养后接种于改良培养基，培养得到种子液；步骤2，将种子液接种于麸皮培养基，培养得发酵液，将发酵液冷冻离心后取上清液；步骤3，将上清液与硫酸铵的混合液沉析后冷冻离心，并收集沉淀物，将沉淀物溶解于Tris‑HCl缓冲液中，透析后冻干，得到粗酶；步骤4，将粗酶用Tris‑HCl缓冲液溶解后透过滤膜，再经DEAE‑Sepharose Fast Flow离子交换柱分离纯化并透析、冻干后得到地衣芽孢杆菌凝乳酶。

主权项

1.一种地衣芽孢杆菌凝乳酶的制备方法，其特征在于，采用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL312进行制备，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL312已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15009，所述地衣芽孢杆菌凝乳酶的制备方法包括以下步骤：步骤1，将所述地衣芽孢杆菌BL312涂布、划线培养14～16小时后接种于改良培养基中，并在温度为37℃、转速为150～170r/min的条件下震荡培养12～14小时后得到种子液；步骤2，将所述种子液以5％接种量接种于麸皮培养基中，在温度为37℃、转速为150r/min的条件下震荡培养40～48小时后得发酵液，将该发酵液在4℃的温度下以5000r/min的转速进行10min的冷冻离心后，取上清液；步骤3，将所述上清液与硫酸铵混合来得到混合液，将该混合液在4℃的温度下沉析2小时后，再在4℃的温度下以7000r/min的转速进行10min的高速冷冻离心，而后收集沉淀物，并将该沉淀物溶解于20mmol/L且pH值为7的Tris‑HCl缓冲液中，透析2～4小时后进行冷冻干燥，得到粗酶；步骤4，将所述粗酶用20mmol/L且pH值为7的所述Tris‑HCl缓冲液溶解后在压力下透过滤膜，再经DEAE‑Sepharose Fast Flow离子交换柱分离纯化并透析、冷冻干燥后得到所述地衣芽孢杆菌凝乳酶。