[发明专利]构建FSCN1基因稳定敲除细胞系方法及质粒或质粒组合和应用

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种构建FSCN1基因稳定敲除细胞系方法及质粒或质粒组合和应用。本发明的目的是针对siRNA转染瞬时敲降FSCN1方法的不稳定性和不彻底性，提供一种从基因组中稳定敲除FSCN1基因的方法，该方法除了用于研究FSCN1功能外，还可以用于构建FSCN1基因敲除细胞系。本发明所提供的基于CRISPR‑Cas9系统构建FSCN1基因敲除细胞系的方法，所述方法以人FSCN1基因第一外显子中的蛋白编码序列和第五外显子中的蛋白编码序列中符合5‘‑G‑N18‑NGG‑3或5‘‑G‑N20‑NGG‑3’或5’‑CCN‑N18‑C‑3’或5’‑CCN‑N20‑C‑3’序列规则排列的片段的“N18或N20”为靶序列；N表示A、T、C、G中的任一种，其中“N18”和“N20”分别为18和20个脱氧核苷酸。

主权项

1.一种构建FSCN1基因稳定敲除细胞系的方法，是采用基于CRISPR‑Cas9系统构建FSCN1基因敲除细胞系，其特征在于：所述方法以人FSCN1基因第一外显子中的蛋白编码序列和第五外显子中的蛋白编码序列中符合5‘‑G‑N18‑NGG‑3或5‘‑G‑N20‑NGG‑3’或5’‑CCN‑N18‑C‑3’或5’‑CCN‑N20‑C‑3’序列规则排列的片段的“N18或N20”为靶序列；N表示A、T、C、G中的任一种，其中“N18”和“N20”分别为18和20个脱氧核苷酸。