[发明专利]斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法有效
| 申请号： | 201910090967.6 | 申请日： | 2019-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN109628454B | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 任建峰;黄姣;霍锦倩;刘姣;祖尧;李伟明 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 胡永宏 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法，包括以下步骤：选择斑马鱼gys1基因序列的第四个外显子序列设计gys1基因敲除的靶点，gys2基因序列的第三个外显子序列设计gys2基因敲除的靶点，根据上述靶点序列设计扩增引物，以pUC19‑scaffold plasmid为模板进行PCR扩增，经纯化和体外转录获得gys1和gys2基因敲除靶点gRNA，再将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼受精卵中，获得稳定遗传的斑马鱼gys1和gys2基因纯合突变体。斑马鱼产卵量大，繁殖周期短，胚体透明，有助于进一步研究人类糖原贮积症的发病进程及详细机制。 | ||
| 搜索关键词： | 斑马 糖原 贮积症 gys1 gys2 基因 突变体 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选择斑马鱼gys1基因序列的第四个外显子序列设计gys1基因敲除的靶点，斑马鱼gys2基因序列的第三个外显子序列设计gys2基因敲除的靶点；(2)根据步骤(1)中gys1和gys2基因敲除的靶点序列设计扩增引物；(3)以pUC19‑scaffold plasmid为模板，用步骤(2)中所述扩增引物进行PCR扩增；(4)对步骤(3)中PCR产物进行纯化，体外转录，获得斑马鱼gys1和gys2基因敲除靶点gRNA；(5)将步骤(4)获得的靶点gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼受精卵中；(6)培养获得稳定遗传的斑马鱼gys1和gys2基因纯合突变体。
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