[发明专利]采用柱前衍生HPLC-MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法

摘要

本发明公开了一种采用柱前衍生HPLC‑MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法，该方法是以淀粉类糖浆专属性成分麦芽寡糖（DP6‑8）为指标，采用柱前衍生高效液相色谱蒸发光检测法检查启脾丸是否存在掺假蜂蜜的现象。采用本发明的方法可以避免启脾丸中白术成分所含的寡糖对检测结果的干扰，阴性对照样品无干扰，灵敏度高、检测效果好，为启脾丸辅料蜂蜜的投料监管提供了技术支撑。

主权项

1.一种采用柱前衍生HPLC‑MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法，其特征在于，所述方法是以淀粉类糖浆专属性成分麦芽寡糖（DP6‑8）为指标，采用柱前衍生高效液相色谱蒸发光检测法检查启脾丸是否存在掺假蜂蜜的现象，具体内容如下：（1）色谱条件：色谱柱Waters CORTECS (150 mm×4.6 mm，2.7 μm)，以乙腈为流动相A，含0.1%甲酸的水为流动相B，进行洗脱16分钟；流速为0.5 mL/min；柱温35℃；（2）质谱条件：采用电喷雾正离子模式（ESI⁺），多反应离子监测（MRM）；干燥气温度：300℃ ；雾化器压力：40Psi；干燥气流速：5 L/min；鞘流气温度：300℃ ；鞘流气流速：10 L/min；毛细管电压：4000 v；喷嘴电压：500 V；选择m/z 1483.7→511.3作为麦芽七糖的检测离子对，选择m/z 1321.5→511.3作为麦芽六糖的检测离子对；（3）对照品溶液的制备：取麦芽六糖和麦芽七糖适量，精密称定，加水制成每1 mL含麦芽六糖0.9μg、麦芽七糖2.8μg的混合溶液，摇匀，即得；（4）供试品溶液的制备：取样品适量，剪碎，取1 g，精密称定，置15 mL离心管中，精密加水10mL，涡旋至全部溶散，以12000 r/min转速离心10分钟，精密吸取上清液1mL，缓缓加至活性炭固相萃取柱中，用7%乙醇25 mL洗脱，弃去洗脱液，再用50%乙醇10 mL洗脱，收集洗脱液，置10 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；（5）衍生：分别取上述对照品溶液和供试品溶液各200 μL置于反应容器中，依次加入200 μL氨水和200 μL 0.3 M 1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮，于70℃下反应1 小时，反应液用氮气吹干，加水1.00 mL溶解，加三氯甲烷1mL振摇提取3次，弃去有机相，得到水相，过0.22μm滤膜，取滤液，即得衍生后的对照品溶液和供试品溶液；（6）测定：分别精密吸取衍生后的对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入液相色谱‑质谱联用仪，测定，即得；（7）结果判断：以m/z 1321.5→511.3和m/z1483.7→511.3提取的供试品离子流色谱中，应不得同时出现麦芽六糖和麦芽七糖对照品溶液色谱保留时间一致的色谱峰；若同时出现，则供试品色谱中m/z 1321.5→511.3和m/z1483.7→511.3的色谱峰面积值均应不得大于对照品溶液中相应的峰面积值。