[发明专利]一种提高腺相关病毒产量的生产工艺

摘要

本发明属于细胞工程领域，具体涉及一种提高腺相关病毒产量的生产工艺。本发明提供的提高腺相关病毒产量的生产工艺，主要是将腺相关病毒三质粒转染入293T细胞的过程中，向含有贴壁细胞的培养液中加入促细胞增殖因子，促进细胞增殖，为腺相关病毒提供更多的载体，并选择特定的三种质粒载体，提高了腺相关病毒的体外存活时间。本发明提供的提高腺相关病毒产量的生产工艺，可以显著提高293T细胞生产腺相关病毒的产量，且操作方法极其简单，为腺相关病毒的规模化生产提供了有力依据。

主权项

1.一种提高腺相关病毒产量的生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：S1、细胞培养：将细胞复苏至T75放瓶中，使用含8％～10％牛血清的营养液培养3代后，收获细胞状态较好的293T悬浮细胞，接种入10～15cm平皿进行培养，达到规定的细胞培养参数后，放入培养箱，设置好CO₂培养箱的培养参数，培养20‑28h，细胞汇合率达到80％～90％，得含贴壁细胞的混合液；S2、将腺相关病毒三质粒转染入293T细胞：去掉步骤S1所得含贴壁细胞的混合液中的上清液，贴壁缓慢加入15～25mL含牛血清及促细胞增殖因子7～10g的DMEM培养基，然后混匀，逐滴加入含腺相关病毒的转染混合液，轻轻摇晃混匀，得转染混悬液；S3、293T细胞的孵育培养：将步骤S2所得转染混悬液放在CO₂培养箱中，设置好孵育的培养参数，培养20～28h，弃掉上清液，加入含有CaCl₂溶液及促细胞增殖因子的无血清DMEM培养液，再设置好孵育后的培养参数培养，进行孵育培养24～72h，得含腺相关病毒的混合液；S4、腺相关病毒液的收集：收获步骤S3所得含腺相关病毒的混合液的细胞和上清液，进一步纯化，即得。