[发明专利]液相色谱串联质谱测定维生素B12的方法及试剂盒

摘要

本发明公开一液相色谱串联质谱测定维生素B12的方法及试剂盒，取检测血清或检测血浆，加入甲氨喋呤内标定量，通过将游离维生素B12从维生素B12中游离出来，提供氰基离子，稳定钴胺素异构体为氰钴胺素；利用固相萃取法对维生素B12进行富集的步骤，并采用串联质谱检测进行人体血浆或血清内维生素B12的测定，特异性强，灵敏度高，可满足临床检测的需求。

主权项

1.液相色谱串联质谱测定维生素B12的方法，测定血清或血浆中维生素B12，其特征在于，包括：(1)取检测血清或检测血浆，加入甲氨喋呤内标；(2)维生素B12的提取和稳定：维生素B12的提取：将结合态维生素B12从钴胺素结合蛋白中游离出来；维生素B12的稳定：提供氰基离子，转化钴胺素异构体(羟钴胺素、甲钴胺素和5‑脫氧腺苷钴胺素)为相对稳定的氰钴胺素；(3)净化浓缩氰钴胺素：利用固相萃取法对维生素B12进行净化富集；以及(4)串联质谱检测；其中色谱条件选择为：色谱柱：Kinetex 2.6μm Polar C18LC Column 50 x 2.1mm；流动相A液：含有甲酸的乙酸铵水溶液；流动相B液：含有甲酸的乙酸铵甲醇溶液：流速：0.3‑0.4mL/min；进样量：20μL‑40μL；柱温：30‑40℃；其中质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子模式；离子喷雾电压：4500‑5500V；离子源温度：400‑500℃；气帘气：20‑35psi；碰撞气：9psi；离子源雾化气：40‑55psi；离子源加热辅助气：40‑60psi；扫描模式：MRM；对应维生素B12和内标的检测离子对及其他条件如下表：(4)定量检测：获取检测结果，代入维生素B12标准品回归方程得到血清或血浆中B12的含量，其中维生素B12标准品回归方程以标准溶液浓度为X轴，标准品和内标峰面积的比值为Y轴，进行线性回归分析得到。