[发明专利]一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法在审
| 申请号： | 201910106196.5 | 申请日： | 2019-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN109652365A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 吴兵;陈玲;顾纬卿;张徐祥;任洪强 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法，顺序进行如下步骤：(1)取斑马鱼胚胎，加入Pronase E的水溶液；(2)37℃孵育4～5min；(3)使用2mL一次性滴管轻轻吹吸胚胎使绒毛膜剥落，移入1.5mL无酶离心管中，并快速吸走Pronase E；(4)加入E3培养基洗涤，移除，反复3～5遍；(5)加入冰上预冷的分散酶；(6)37℃孵育2‑5min，孵育期间间歇震荡；(7)加入FBS终止消化；(8)将步骤(7)得到的悬液过70μm筛网，将滤液再过40μm筛网；(9)过筛后的悬液200～500×g离心3～5min；(10)取冰上预冷的含1％的BSA的HBSS重悬细胞；(11)200～500×g离心步骤(10)得到的悬液3～5min；(12)重复步骤(10)和(11)清洗一次；(13)取冰上预冷的IESC重悬细胞，即得。 | ||
| 搜索关键词： | 斑马鱼胚胎 孵育 悬液 预冷 单细胞悬液 筛网 重悬 制备 一次性滴管 细胞 间歇震荡 离心步骤 培养基 分散酶 离心管 绒毛膜 过筛 移除 移入 剥落 洗涤 胚胎 清洗 消化 重复 | ||
【主权项】：
1.一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法，其特征在于，顺序进行如下步骤：(1)取斑马鱼胚胎，加入Pronase E的水溶液；(2)37℃孵育4～5min；(3)使用2mL一次性滴管轻轻吹吸胚胎使绒毛膜剥落，移入1.5mL无酶离心管中，并快速吸走Pronase E；(4)加入E3培养基洗涤，移除，反复3～5遍；(5)加入冰上预冷的分散酶；(6)37℃孵育2～5min，孵育期间间歇震荡；(7)加入FBS终止消化；(8)将步骤(7)得到的悬液过70μm筛网，将滤液再过40μm筛网；(9)过筛后的悬液200～500×g离心3～5min；(10)取冰上预冷的含1％的BSA的HBSS重悬细胞；(11)200～500×g离心步骤(10)得到的悬液3～5min；(12)重复步骤(10)和(11)清洗一次；(13)取冰上预冷的IESC重悬细胞，即得。
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