[发明专利]一种单基因病全基因组永生基因库的构建在审
申请号: | 201910109195.6 | 申请日: | 2019-02-05 |
公开(公告)号: | CN109943534A | 公开(公告)日: | 2019-06-28 |
发明(设计)人: | 翁炳焕;杨昊堃;李蓉 | 申请(专利权)人: | 翁炳焕 |
主分类号: | C12N5/16 | 分类号: | C12N5/16;C12N5/10 |
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地址: | 317300 浙江省台*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 一种用于生物医学领域的单基因病全基因组永生基因库的构建,其特征在于,构建含新霉素抗性基因的pLXSN载体,进而构建SV40 LT‑pLXSN载体并转染sp2/0细胞,以G418筛选阳性克隆,获得永生化特性改良和新霉素抗性基因标记的sp2/0细胞,经与基因突变细胞融合,获得具有两亲代细胞遗传特性、对G418和HAT联合筛选不敏感、贮藏了基因突变细胞全基因组、能永久冻存并能在体外无限扩增的杂交瘤细胞株,将突变基因收藏于杂交瘤细胞株,又将杂交瘤细胞株收藏于杂交瘤细胞库,以及以杂交瘤细胞的无限繁殖而复制单基因病基因,由此建立单基因病全基因组永生基因库。 | ||
搜索关键词: | 全基因组 单基因 构建 杂交瘤细胞株 基因库 新霉素抗性基因 基因突变 细胞 生物医学领域 杂交瘤细胞库 收藏 杂交瘤细胞 亲代细胞 突变基因 细胞融合 阳性克隆 遗传特性 病基因 不敏感 永生化 冻存 扩增 体外 转染 贮藏 繁殖 复制 改良 筛选 联合 | ||
【主权项】:
1.一种单基因病全基因组永生基因库的构建,其特征在于,构建含有SV40 LT和新霉素抗性基因的SV40 LT‑pLXSN载体并转染sp2/0细胞而制成永生性改良和新霉素抗性基因标记的包装sp2/0细胞,进而通过包装sp2/0细胞与基因突变细胞融合以及经G418和HAT双筛选而制成因含有SV40 LT而增强永生性、因含有新霉素抗性基因而抵抗G418筛选的杂交瘤细胞,其中突变基因随杂交瘤细胞的无限繁殖而扩增,随杂交瘤细胞的冻存而冻存,由此建立全基因组永生基因库。
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