[发明专利]一种单基因病全基因组永生基因库的构建在审

专利信息
申请号: 201910109195.6 申请日: 2019-02-05
公开(公告)号: CN109943534A 公开(公告)日: 2019-06-28
发明(设计)人: 翁炳焕;杨昊堃;李蓉 申请(专利权)人: 翁炳焕
主分类号: C12N5/16 分类号: C12N5/16;C12N5/10
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 317300 浙江省台*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 一种用于生物医学领域的单基因病全基因组永生基因库的构建,其特征在于,构建含新霉素抗性基因的pLXSN载体,进而构建SV40 LT‑pLXSN载体并转染sp2/0细胞,以G418筛选阳性克隆,获得永生化特性改良和新霉素抗性基因标记的sp2/0细胞,经与基因突变细胞融合,获得具有两亲代细胞遗传特性、对G418和HAT联合筛选不敏感、贮藏了基因突变细胞全基因组、能永久冻存并能在体外无限扩增的杂交瘤细胞株,将突变基因收藏于杂交瘤细胞株,又将杂交瘤细胞株收藏于杂交瘤细胞库,以及以杂交瘤细胞的无限繁殖而复制单基因病基因,由此建立单基因病全基因组永生基因库。
搜索关键词: 全基因组 单基因 构建 杂交瘤细胞株 基因库 新霉素抗性基因 基因突变 细胞 生物医学领域 杂交瘤细胞库 收藏 杂交瘤细胞 亲代细胞 突变基因 细胞融合 阳性克隆 遗传特性 病基因 不敏感 永生化 冻存 扩增 体外 转染 贮藏 繁殖 复制 改良 筛选 联合
【主权项】:
1.一种单基因病全基因组永生基因库的构建,其特征在于,构建含有SV40 LT和新霉素抗性基因的SV40 LT‑pLXSN载体并转染sp2/0细胞而制成永生性改良和新霉素抗性基因标记的包装sp2/0细胞,进而通过包装sp2/0细胞与基因突变细胞融合以及经G418和HAT双筛选而制成因含有SV40 LT而增强永生性、因含有新霉素抗性基因而抵抗G418筛选的杂交瘤细胞,其中突变基因随杂交瘤细胞的无限繁殖而扩增,随杂交瘤细胞的冻存而冻存,由此建立全基因组永生基因库。
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