[发明专利]一种分子层析PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种分子层析PCR检测方法，采用一种多层垂直流动型层析检测卡盒进行检测，包括：第一步，将待测样品进行PCR反应，得到PCR产物；第二步，将待测样品标记的PCR产物放置于所述检测卡盒的缀合物垫上反应，检测线或点出现紫红色沉淀带；过量的样品胶体金复合物会继续渗透到包被在结合物垫上的质控线或点，与质控线或点上的Biotin‑牛血清白蛋白结合，也出现紫红色沉淀带，质控线或点若没有出现紫红色沉淀带，表示该检测是无效的；第三步，激活检测卡盒开关，查看结果。本发明可以消除样液回流从而防止假阳性检测结果，使检测不受样品性状、复杂基质和外来气溶胶的影响，操作简便、检测结果准确。

主权项

1.一种分子层析PCR检测方法，其特征在于：采用一种多层垂直流动型层析检测卡盒，该检测卡盒具有一体化的壳体构件，包括位于卡盒上部的第一壳体构件(1)以及位于卡盒下部的第二壳体构件(2)，所述第一壳体构件(1)上设有加样窗(10)，加样窗(10)下设置检测试纸，该检测试纸由上至下包括：由过滤衬垫(3)和第一过滤膜(4)组成的缀合物垫(15)、由加固垫(5)和第二过滤膜层(11)组成的结合物垫(16)、一至若干层吸水垫；该检测试纸将加样区与检测区结合在一起，形成一种垂直流动型层析结构；该卡盒的第二壳体构件(2)内具有一个受力支撑构件(8)和一个与缀合物垫(15)连接在一起的收缩构件(9)，受力支撑构件(8)挤压缀合物垫(15)、结合物垫(16)和吸水垫，使之与加样窗(10)紧密贴合在一起；触动收缩构件(9)，移开与收缩构件(9)连接在一起的缀合物垫(15)，使缀合物垫(15)与结合物垫(16)相互分离，使位于结合物垫(16)上的检测区暴露于加样窗(10)，从而使结果可视化；所述检测方法包括如下步骤：第一步，将待测样品进行PCR反应，得到PCR产物；第二步，将待测样品标记的PCR产物放置于所述检测卡盒的缀合物垫(15)上，待测样品标记的PCR产物会将缀合物垫(15)上的交联体溶解，通过第一过滤膜(4)的渗透过滤作用，将液体渗透到包被了抗体的结合物垫(16)上，包被在结合物垫(16)上检测线或点(52)的抗体与样本中的待检片段及胶体金形成一个双抗体夹心的免疫复合物，出现紫红色沉淀带；过量的样品胶体金复合物会继续渗透到包被在结合物垫(16)上的质控线或点(51)，与质控线或点(51)上的Biotin‑牛血清白蛋白结合，也出现紫红色沉淀带，质控线或点(51)若没有出现紫红色沉淀带，表示该检测是无效的；第三步，激活检测卡盒开关，查看结果。