[发明专利]一种草果优良单株的组织培养方法

摘要

一种草果优良单株的组织培养方法，它涉及植物组织培养技术领域。它包括如下步骤：步骤一、优良单株选择；步骤二、外植体的选择；步骤三、外植体的处理与消毒；步骤四、诱导培养；步骤五、增殖培养；步骤六、生根培养；步骤七、炼苗移栽。本发明有益效果为：本发明以优良单株的幼嫩芽体为繁殖材料，利用植物组织培养方法建立了草果的快速繁殖体系，为草果良种繁育与推广应用提供了技术保障，是解决草果生产中优质种苗短缺以及提升草果产业建设质量的有效途径。本发明以优良单株的幼嫩芽体为繁殖材料，采用无性繁殖方式培育无性系苗木，培育苗木具有良好的遗传稳定性，能将优良单株上的优良性状完全地遗传给无性系后代。

主权项

1.一种草果优良单株的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、优良单株选择：在当年10‑11月草果成熟季节，在农户报优与现场调查相结合的基础上，以产量为第一指标，初步确定选择母株并进行标记，同时对标记母株的每丛果穗数、每穗小花数、每穗结果数、每穗果重进行调查统计，比较各母株间的产量、结实率等指标，选择生长健壮、产量大、结实率高、丰产性好的单株作为开展组织培养繁殖材料的入选单株；步骤二、外植体的选择：以标记的入选单株作为采集繁殖材料的母株，以新生带芽根茎作为外植体；外植体采集在次年的4‑6月进行；待新生带芽根茎伸长并抽出第一个叶片时用锋利刀具将新生带芽根茎从新老根茎结合处切下，装入保鲜袋并及时运回试验室进行消毒处理；步骤三、外植体的处理与消毒：剪去外植体上过长的叶片、苞片及根系，流水冲洗30min，洗净外植体表面泥土及杂质，然后在流水下从基部开始自下而上采取环状剥离的方式剥除苞片及叶片；剥离时用力均匀，用力方向与根茎垂直，确保完全去除苞片、叶片；去除苞片、叶片的外植体用棉花蘸洗衣粉水由自下而上方向进行擦洗，流水冲洗后以芽为中心切成1cm大小的带芽方形小块，无菌水漂洗后在超净工作台上用0.1％的HgCl₂溶液消毒10min，然后无菌水漂洗3‑5次，每次3‑5min，漂洗完后用无菌滤纸吸干水分；步骤四、诱导培养：将经消毒并吸干水分的带芽方形小块外植体接种到诱导培养基上进行诱导培养；外植体接种后，芽体由白色逐渐转为黄绿色，7d开始萌动并逐渐长大，20d后有新芽突破芽体苞片，继续培养20～30d形成1‑3个丛生芽；步骤五、增殖培养：将诱导培养获得的丛生芽剪除多余的新生苞片或叶片，保留1‑2cm并带1‑2个芽体的无菌小苗接入增殖培养基上进行增殖培养，经40～50d培养后可形成带2‑4个芽体的丛生芽；在生根培养之前，每隔40d，对培养获得的丛生芽进行剪切并接入增殖培养基中进行增殖培养，可实现小苗的增殖与快速繁殖；步骤六、生根培养：待增殖培养分化得到的小芽苗长到2～4cm时，将丛生芽切成单芽小苗，转接到生根培养基上进行生根培养；小苗接种后10d开始有根系形成，经30d培养后可形成具根系2～5条，根长1～5cm的完整小植株，生根率可达100％；步骤七、炼苗移栽：当生根培养25d，小苗生根率达95％以上时，即可将小苗由培养室移到遮光率75％的自然光温室或大棚中进行炼苗；炼苗3‑5d后即可进行移栽；移栽时将小苗从培养瓶中取出，流水冲洗干净附着在根系表面的培养基，然后用0.5％的高锰酸钾浸泡消毒10min；然后将小苗移栽到装有移栽基质为泥炭土：珍珠岩＝5：1的育苗盘中，移栽前移栽基质用800倍的百菌清或甲基托布津进行浇淋消毒，移栽时扶正小苗并确保根系被基质覆盖不外露，移栽后用喷雾器喷水并进行遮荫保湿及病害防治管理；移栽20天后即可成活，成活率可达100％；小苗移栽成活后，可将小苗移入营养袋或假植于苗床进行大苗培育，满足造林需要。