[发明专利]利用Tag-lite结合分析实验技术筛选腺苷A2A受体配体的方法在审
| 申请号： | 201910116958.X | 申请日： | 2019-02-15 |
| 公开（公告）号： | CN109799354A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 张冰洁 | 申请（专利权）人： | 浠思（上海）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用Tag‑lite结合分析实验技术筛选腺苷A2A受体配体的方法，属于腺苷A2A受体配体的筛选领域。利用Tag‑lite结合分析实验技术筛选腺苷A2A受体配体的方法，该方法包括如下步骤：构建特定标签融合的目的细胞膜表面蛋白表达载体；使用HTRF荧光基团供体共价结合的标签特异性底物标记标签融合细胞膜表面蛋白；将标记的细胞或细胞膜与结合配体进行孵育，孵育后进行HTRF的检测，根据数据结果计算待测样品的Kd或Ki值。本发明的优点在于：信号强，结果可靠，运用了新的标记技术，使信号更强更稳定；基于细胞的均相检测体系，真实反应受体配体的结合情况，结果可靠。 | ||
| 搜索关键词： | 腺苷A2A受体 配体 结合分析 实验技术 筛选 细胞膜表面 孵育 细胞膜 蛋白表达载体 细胞 特异性底物 标记标签 标记技术 标签融合 待测样品 共价结合 结合配体 受体配体 数据结果 荧光基团 真实反应 信号强 检测 供体 构建 蛋白 标签 融合 | ||
【主权项】：
1.利用Tag‑lite结合分析实验技术筛选腺苷A2A受体配体的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：步骤一，构建特定标签融合的目的细胞膜表面蛋白表达载体，所述载体为SNAP‑tag,CLIP‑tag或HaloTag融合的目的蛋白中的一种；步骤二，利用Tag‑lite技术将构建好的载体转染细胞使其表达此融合蛋白，所述Tag‑lite技术兼容瞬时转染细胞或稳转细胞株；步骤三，使用HTRF荧光基团供体共价结合的标签特异性底物标记标签融合细胞膜表面蛋白；步骤四，使用对应的HTRF荧光基团受体标记目的结合配体，利用Tag‑lite技术对缩氨酸，非缩氨酸、复合物的配体结合，和抗体结合进行分析；步骤五，进行生物分子的结合分析实验，将标记的细胞或细胞膜与结合配体进行孵育，孵育后进行HTRF的检测，根据数据结果计算待测样品的Kd或Ki值。
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