[发明专利]染色体1p/19q联合杂合性缺失的检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201910117207.X | 申请日： | 2019-02-15 |
| 公开（公告）号： | CN109666745A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 魏金旺;张敖;王晨;戴春;许强 | 申请（专利权）人： | 领星生物科技（上海）有限公司;上海领安生物科技有限公司;启东领星医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 上海市汇业律师事务所 31325 | 代理人： | 陆红杰 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区中国（上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种染色体1p/19q联合杂合性缺失的检测方法，步骤包括：1）在1p和19q上选择相同数量的SNP位点；2）设计原始引物，将每条原始引物最靠近3’端但非末尾的T修改为U，若3’端末尾为T，则将往5’方向的第2个T修改为U，获得多重扩增引物序列；3）合成多重扩增引物并溶解混合；4）多重PCR扩增；5）处理扩增产物，使U的单链形成一AP位点，再暴露出AP位点的5’磷酸和3’磷酸末端；6）测序，根据SNP等位型频率判断该染色体是否发生1p/19q联合杂合性缺失。本发明基于多重扩增子的NGS方法检测Chr1p/19q co‑LOH，不仅检测灵敏度、特异性和效率高，而且对样本限制小。 | ||
| 搜索关键词： | 多重扩增 杂合性 染色体 原始引物 末尾 位点 检测 多重PCR扩增 检测灵敏度 扩增产物 磷酸末端 频率判断 溶解混合 引物序列 等位型 试剂盒 联合 磷酸 测序 单链 引物 样本 合成 暴露 | ||
【主权项】：
1.染色体1p/19q联合杂合性缺失的检测方法，其特征在于，步骤包括：1）在1号染色体短臂1p和19号染色体长臂19q上分别选择相同数量的SNP位点；2）根据步骤1）选择的位点，设计适用于多重扩增的原始引物，然后将每条原始引物最靠近3’端但不是末尾的T修改为U，如果3’端末尾为T，则将往5’方向的第2个T修改为U，获得多重扩增引物序列；3）合成步骤2）所得多重扩增引物，并进行溶解混合；4）进行多重PCR扩增反应；5）用尿嘧啶DNA糖基化酶处理步骤4）所得扩增产物，使U的单链形成一个AP位点；再用核酸内切酶Ⅷ分别在AP位点的3’和5’端切割磷酸二酯键，产生5’磷酸末端和3’磷酸末端；6）构建测序文库，进行高通量二代测序，根据SNP等位型频率判断该染色体是否发生1p/19q联合杂合性缺失。
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