[发明专利]一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法

摘要

本发明公开了一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法，将肝细胞、肝星状细胞、枯否细胞及肝窦内皮细胞，混悬于培养基A；培养至第4天，换为培养基B维持培养；第10天开始，换为培养基C，连续培养六天。发明基于肝脏内细胞成分比例，快速构建大小结构均一、纤维化表征明显的3D肝脏纤维化类器官体外模型。本发明构建的肝脏纤维化类器官模型，原理明确，结构稳定，方法简易，构建迅速，可操作性强，适用于肝脏纤维化发生发展机制研究，抗纤维化药物高通量筛选等，具有产业化意义。

主权项

1.一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法，其特征是：包括下列步骤：将肝细胞、肝星状细胞、枯否细胞及肝窦内皮细胞，混悬于培养基A；培养至第4天，换为培养基B维持培养；第10天开始，换为培养基C，连续培养六天；所述培养基A包括：牛胰岛素、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、I型鼠尾胶原蛋白和无酚红威廉姆斯E培养基；所述培养基B包括：庆大霉素、转铁蛋白、维生素C，牛胰岛素、胎牛血清、亚硒酸钠、亚油酸、氢化可的松、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、谷氨酰胺、人表皮生长因子和HBM肝细胞基础培养基；所述培养基C包括：庆大霉素、转铁蛋白、维生素C、牛胰岛素、胎牛血清、亚硒酸钠、氢化可的松、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、谷氨酰胺、转化生长因子‑β、人表皮生长因子和HBM肝细胞基础培养基。