[发明专利]一种蛇足石杉离体组织培养、繁殖与保存的方法

摘要

本发明公开了一种蛇足石杉离体组织培养、繁殖与保存的方法，建立了蛇足石杉组织培养过程中最佳快速繁殖体系，包括最适宜的外植体的选择方法，高效的多重灭菌方法；解决了不同基因型的蛇足石杉离体生长繁殖与保存等关键技术问题，最终实现蛇足石杉在短时间内大量、快速、高质量的繁殖与保存。本发明可离体再生来源不同省份、不同基因型的蛇足石杉，离体的蛇足石杉组织能产石杉碱甲。这可以有效地满足人们对蛇足石杉日益增长的需求，进而减少人们对野生蛇足石杉的破坏，有利于野生蛇足石杉的保护，具有巨大的科研价值、经济价值和生态价值。

主权项

1.一种蛇足石杉离体组织培养、繁殖与保存的方法，包括以下步骤：(1)选取蛇足石杉的幼嫩茎段作为外植体；(2)将外植体用无菌水冲洗3‑5遍后，用75％体积比的乙醇表面灭菌30秒，并用10％的双氧水H2O2表面灭菌8min，再用无菌水冲洗2‑3遍，然后用0.15％的HgC12灭菌5min，最后用无菌水冲洗3‑5遍，得到无菌外植体；(3)将无菌外植体接种于改良的SH培样基或改良的6,7‑V培养基上，以pH值为5.8‑6.0、温度为25±2℃、相对湿度为60％‑70％、光照强度为2000‑2500Lx、光照时间13h/d、技术指标为外植体污染率低于10％‑20％的条件培养，得到脱分化后的外植体；(4)将脱分化后的外植体去除老叶，再转接到分化扩繁培养基上分化与增殖，培养条件同步骤(3)，进行增殖培养30‑40d，分化率与增殖率100％，得到蛇足石杉离体再生的叶状体；(5)将蛇足石杉离体再生的叶状体接种于保存培养基上培养，50‑80天继代一次；如需再次离体繁殖，则再次接种到分化扩繁培养基上分化与增殖；其中，改良的SH培样基包含以下组分：SH基本培养基、NAA 1.0mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.0g/L；改良的6,7‑V培养基包含以下组分：1/2 6,7‑V基本培养基、NAA 1.0mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.0g/L；分化扩繁培养基包含以下组分：1/2 SH基本培养基或1/2 6,7‑V基本培养基、NAA 0.5mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.0g/L；保存培养基包含以下组分：SH基本培养基、蔗糖20g/L、琼脂6.0g/L。