[发明专利]一种甲酰基肽定向进化噬菌体及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种甲酰基肽定向进化噬菌体及其制备方法与应用。其制备方法为构建Pcantab 5E质粒载体，将其转化感受态End A⁺细胞，经辅助噬菌体包装后扩增得到甲酰基肽噬菌体。所述甲酰基肽的一级结构通式为：WKYMVM及其他变形；所述甲酰基肽位于噬菌体的PⅢ衣壳蛋白上。本发明甲酰基肽定向进化噬菌体能激活细胞膜上甲酰肽受体2（FPR2），促进成纤维细胞增殖和迁移，以及间充质干细胞向成骨方向分化，在人工血管、智能皮肤和骨修复支架材料等领域具有应用潜力。

主权项

1.一种甲酰肽定向进化噬菌体的制备方法,其特征在于，包括如下步骤：1)将M13K07噬菌体PⅢ展示Pcantab 5E质粒依次采用Not I和Sfi I酶切后电泳，切胶回收得到双酶切质粒载体；2)设计甲酰基肽编码DNA序列，并在其5’端和3’端分别引入限制性酶酶切位点，合成目的序列,加热退火后得到双链插入片段；所述甲酰基肽的一级结构通式为：WYKMVM及其他变形；3)将所述步骤1)得到的双酶切质粒载体和步骤2)得到的插入片段通过T4DNA连接酶反应得到重组质粒；4)将所述步骤3)得到的重组质粒转化感受态End A⁺细胞，铺平板，挑取单克隆，扩增得到阳性菌，提取质粒，测序验证插入片段的完整性；5)将步骤4)得到的阳性菌与M13K07辅助噬菌体共培养，扩增、分离得到甲酰基肽定向进化噬菌体。