[发明专利]一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法

摘要

本发明公开了一种超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法，是将样品经过混合溶液(乙腈：水：乙酸＝29:70:1)超声萃取10min，离心，通过HLB萃取小柱进行净化除杂和富集，富集后使用甲醇复溶即完成测试样的制备，经超高效液相色谱仪分离后，采用三重四级杆串联质谱仪进行多反应离子监测模式检测。本发明16种生物毒素在50～1000ng/mL范围内线性关系好，相关系数r2均大于0.993，样品的平均回收率在90～120％，检出限在2.69～5.16ng/mL，本发明方法准确可靠、简单快捷，可用于同时检测酿酒原料中16种生物毒素。

主权项

1.一种超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：各生物毒素保留时间和监测离子的确定分别取黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、脱氧血腐镰刀菌烯醇、3‑乙酰基脱氧血腐镰刀菌烯醇、15‑乙酰基脱氧血腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、T‑2毒素、HT‑2毒素、杂色曲霉毒素、伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3配制浓度为300ng/mL的单标工作溶液，将各单标工作溶液通过三重四极杆串联质谱仪进行母离子的扫描，确定各生物毒素的监测离子和定量离子对，然后将各单标工作溶液进行UPLC‑MS/MS检测，确定各生物毒素的保留时间；步骤2：16种生物毒素标准曲线的绘制取黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、脱氧血腐镰刀菌烯醇、3‑乙酰基脱氧血腐镰刀菌烯醇、15‑乙酰基脱氧血腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、T‑2毒素、HT‑2毒素、杂色曲霉毒素、伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3配制不同质量浓度的混合系列标准工作溶液，然后取混合系列标准工作溶液进样，分别进样2μL，进行UPLC‑MS/MS检测，以各生物毒素的峰面积对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得16种生物毒素的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即为相应生物毒素的标准曲线；步骤3：待测样品的前处理将待测样品经过混合溶液超声萃取10min，萃取结束后于10000转/分钟下离心，从上清液中取10ml通过HLB萃取小柱进行净化除杂和富集，富集后使用甲醇复溶，收集流出液，待进样；步骤4：待测样品的测试取步骤3前处理后的待测样品1.5mL进行UPLC‑MS/MS检测，通过多反应监测模式，获得待测样品的质谱图和色谱图，根据保留时间和16种生物毒素的监测离子对待测样品进行定性分析，根据16种生物毒素标准曲线对待测样品进行定量分析。