[发明专利]低岩藻糖细胞系及其应用在审
| 申请号： | 201910129277.7 | 申请日： | 2012-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN109797138A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | D·黑尔曼;M·巴尔-西蒙;M·托耶斯特-阿契杜夫 | 申请（专利权）人： | 默克雪兰诺有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C07K16/00;C07K19/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 余颖 |
| 地址： | 瑞士科*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用作表达重组蛋白宿主细胞的具有零岩藻糖水平的细胞的选择方法。该方法包括：(a)使CHO细胞接触氨甲喋呤(MTX)从而在CHO细胞的细胞群中导入基因突变；(b)使含有突变细胞的CHO细胞群接触无毒岩藻糖结合剂一定的时间量，使岩藻糖结合剂结合于该细胞群细胞膜的岩藻糖部分，其中所述一定的时间量不会导致杀伤细胞；和(c)清除含突变细胞的细胞群中结合该岩藻糖结合剂的细胞亚群，从而选出细胞用作表达重组蛋白的宿主细胞，所选细胞的岩藻糖含量为零。本发明还公开了用作表达重组蛋白宿主细胞的细胞和细胞系。 | ||
| 搜索关键词： | 岩藻糖 表达重组蛋白 宿主细胞 结合剂 细胞群 细胞 突变细胞 时间量 细胞膜 氨甲喋呤 导入基因 杀伤细胞 细胞亚群 突变 无毒 应用 | ||
【主权项】：
1.一种选择用作表达重组蛋白宿主细胞的具有零岩藻糖水平的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的方法，该方法包括：(a)使含有至少一个具有突变GMD蛋白并具有零岩藻糖水平的CHO细胞的CHO细胞群接触无毒岩藻糖结合剂一定的时间量，使该岩藻糖结合剂结合于一个或多个细胞细胞膜上的岩藻糖部分，其中所述一定的时间量不会导致杀伤细胞；和(b)清除含突变细胞的细胞群中结合该岩藻糖结合剂的一个或多个细胞的细胞亚群，从而选出用作表达重组蛋白的宿主细胞的细胞，所选细胞在无外源性岩藻糖条件下的岩藻糖含量为零，且具有如SEQ ID NO：23和/或24所示的突变的GMD，所述细胞表现出高于100群体倍增时间的稳定岩藻糖表型；其中，所述含有至少一个具有突变GMD蛋白并具有零岩藻糖水平的CHO细胞的CHO细胞群是通过细胞与氨甲喋呤(MTX)接触获得的。
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