[发明专利]一种基于PMA染色的病菌定量检测方法在审

专利信息
申请号: 201910130097.0 申请日: 2019-02-21
公开(公告)号: CN109811040A 公开(公告)日: 2019-05-28
发明(设计)人: 张晗;董宏图;王成;侯佩臣;王晓冬;宋鹏;罗斌 申请(专利权)人: 北京农业智能装备技术研究中心
主分类号: C12Q1/6851 分类号: C12Q1/6851;C12Q1/06
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 王文君;陈征
地址: 100097 北京市海淀区*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明一种基于PMA染色的病菌定量检测方法。所述方法包括:(1)将非可溶性固体植物样品剪成碎片,磨样处理后加入磷酸缓冲液,得到组织匀浆;(2)将匀浆分为A、B组,向A组加入PMA,同时向B组匀浆中加入相同体积的水;(3)将A、B两组分别依次进行PMA光交联处理、DNA提取、DNA模板定量、荧光定量PCR处理;(4)根据A、B组的Ct值,计算得出活病菌在总病菌中的所占比例。本方法可以用于判断植物病情,对病情进行分级;同时本发明能够检测植物组织内菌总量和活菌量,计算活菌在植物体内存活比例,提供一种用于判断病害防治方法和杀菌治疗方法的药效评价方法,为黄龙病病害防治提供一种药效及防治快速的评价方法。
搜索关键词: 病菌 病害防治 定量检测 染色 匀浆 荧光定量PCR 磷酸缓冲液 非可溶性 固体植物 药效评价 植物组织 组织匀浆 光交联 活菌量 分级 活菌 两组 磨样 杀菌 存活 体内 检测 防治 治疗
【主权项】:
1.一种基于PMA染色的病菌定量检测方法,其特征在于,包括:(1)将非可溶性固体植物样品剪成碎片,磨样处理后加入磷酸缓冲液,得到组织匀浆;(2)将匀浆分为A、B组,向A组加入PMA,同时向B组匀浆中加入相同体积的水;(3)将A、B两组分别依次进行PMA光交联处理、DNA提取、DNA模板定量、荧光定量PCR处理;(4)根据A、B组的Ct值,计算得出活病菌在总病菌中的所占比例。
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