[发明专利]适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法，包括以下步骤：(1)CHO细胞复苏；(2)片状载体袋中CHO细胞培养；(3)收集分泌蛋白；(4)分泌蛋白纯化。本发明提供了适用于一次性片状载体袋CHO细胞生产EPO、TPO、TPA等分泌型蛋白产物的工艺，采用一次性片状载体袋CHO细胞生产分泌型蛋白产物的工艺在放大的过程中可以容易将细胞和载体分离，细胞转入下一个一次性片状载体袋得以实现，使得大规模生产和高密度细胞生产更加便利。同时使用片状载体袋生产EPO、TPO、TPA可以直接在普通环境下可以实现，直接收获上清液，操作过程简单；且在前期细胞增殖阶段减少转瓶操作，降低操作污染风险，减少人力成本。

主权项

1.适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)CHO细胞复苏取CHO细胞冻存管于37‑40℃水浴，融化后将CHO细胞悬液吸至装有生长液的方瓶内，待细胞汇合度达到80‑90％后，扩大传代，转到方瓶中，其中分种比为1:2‑3；(2)片状载体袋中CHO细胞培养将(1)中方瓶内细胞接种至装有培养基的片状载体袋，细胞接种密度为4E+5个/ml，然后将片状载体袋置于摆床中平衡过夜，其中，片状载体袋培养条件为温度37℃、PH7.2、溶解氧50％；摆床的摆床角度7°、速度30RPM；(3)收集分泌蛋白向(2)中的片状载体袋中连续灌流培养基，并补加7.5％NaHCO₃，同时收集上清液，每天收集上清液的体积为1‑1.5个片状载体袋工作体积，连续收集25‑30天，所得上清液即分泌蛋白；(4)分泌蛋白纯化将(3)所收集的上清液依次经过1um和0.45um滤芯过滤器过滤，然后将过滤后的上清液经纯化得到高纯度的分泌蛋白，再将所得的分泌蛋白进行超滤浓缩，得分泌蛋白原液。