[发明专利]一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法在审
| 申请号： | 201910140331.8 | 申请日： | 2019-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN109797131A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 董焕声;崔金强;潘庆杰;黄娇娇 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/076 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法，包括以下步骤：(1)取出小公猪睾丸组织浸润；(2)用PBS缓冲液清洗；(3)加入细胞培养液培养，离心去上清；(4)加入透明质酸酶和胶原酶IV震荡，加入细胞培养液离心去上清；(5)加入胰蛋白酶和脱氧核糖核酸酶震荡，加入细胞培养液(6)细胞筛过滤；(7)离心去上清液，加细胞培养液；(8)细胞培养传代；(9)将细胞液培养、保存，即得。本发明的优点是应用效果好、成本低、容易加工生产。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞培养液 精子活力 激动剂 种公猪 制备 细胞培养 胰蛋白酶 震荡 脱氧核糖核酸酶 传代 透明质酸酶 加工生产 胶原酶IV 应用效果 睾丸组织 上清液 细胞筛 细胞液 公猪 过滤 浸润 清洗 取出 保存 | ||
【主权项】：
1.一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法，其特征包括以下步骤：(1)取出小公猪睾丸组织，放入加有1％双抗的37℃生理盐水中浸润10～30min；(2)取出浸润后的公猪睾丸组织，用含有1％双抗的PBS缓冲液清洗三遍；(3)加入DMEM/F12细胞培养液，37℃下培养30min，充分分解睾丸组织，将分散后的组织液转移至离心管中，离心去上清液；(4)在离心管中加入1.5mL透明质酸酶和1.5mL胶原酶IV，在37℃下，每隔2分钟剧烈震荡一次，连续震荡2～3次后，加入3mL的DMEM/F12细胞培养液，离心去上清液；(5)在离心管中加入1.5mL胰蛋白酶和1.5mL脱氧核糖核酸酶，在37℃下，每隔2分钟剧烈震荡一次，连续震荡2～3次后，加入3mL的DMEM/F12细胞培养液；(6)将细胞液依次用80、200、300目的细胞筛过滤；(7)将过滤后的细胞培养液离心去上清液，加入4～6mL的细胞培养液，吹打混匀，转到细胞培养皿中培养2小时后更换新的细胞培养液；(8)将培养皿中的细胞培养传代，传代后，每个直径为6cm的细胞培养皿接种1×106个细胞；(9)将细胞液培养8小时后取出，放到‑20℃冷冻保存，即得。
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