[发明专利]一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201910142828.3 | 申请日： | 2019-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN109929032A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 邵峰 | 申请（专利权）人： | 青岛今墨堂生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/02;C07K14/085;C07K1/18;C07K1/16;C12N15/41;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 张晓 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市黄岛区*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明的目的是针对上述手足口病病毒感染难以预防和治疗的问题，提供一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法，一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法，包含以下步骤：1)制备手足口病病毒EV71病毒颗粒；2)根据EV71序列设计一对特异性引物，表达VP1蛋白；3)复合抗原的制备；4)将复合免疫抗原对SPF产蛋母鸡进行免疫，获得免疫鸡蛋；5)将免疫鸡蛋蛋黄进行提取、纯化，后过滤除菌，再经过超低温喷雾干燥，即得抗体纯品，4℃保存，本发明所制备的鸡卵黄抗体，具有安全方便、简单易得、产率高、成本低、特异性强。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 鸡卵黄抗体 手足口病 手足口病病毒 免疫鸡蛋 特异性引物 超低温 安全方便 产蛋母鸡 复合抗原 过滤除菌 免疫抗原 喷雾干燥 特异性强 序列设计 蛋黄 产率 抗体 复合 保存 感染 预防 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于描述复合抗原的制备及免疫方法、鸡卵黄抗原的纯化方法及鸡卵黄抗原的稳定性评价方法，包含以下步骤：1)制备手足口病病毒EV71病毒颗粒；2)根据EV71序列设计一对特异性引物，以手足口患儿咽拭子标本提取病毒核酸经逆转录后产物cDNA为模板，PCR扩增VP1基因，再经PCR扩增后双酶切的方法构建原核表达载体pET22b‑VP1，测序成功后的表达载体用于VP1蛋白的表达；3)复合抗原的制备；4)将复合免疫抗原对SPF产蛋母鸡进行免疫，获得免疫鸡蛋；5)将免疫鸡蛋蛋黄进行提取、纯化，后过滤除菌，再经过超低温喷雾干燥，即得抗手足口病的鸡卵黄抗体纯品，4℃保存。
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