[发明专利]一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法

摘要

本发明公开了一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法。首先通过乳液聚合法制得水凝胶溶液，该水凝胶在低温下能保持溶液状态，在接近人体生理温度之后能迅速形成水凝胶。基于该温敏水凝胶材料，本发明通过以下两种方案实现细胞的非酶收获：1)将细胞悬液和水凝胶溶液混合后置于37℃细胞培养箱，混合液迅速形成凝胶后加入37℃的培养基进行培养，之后通过降温释放细胞；2)将水凝胶溶液先涂在基底表面，置于37℃细胞培养箱中，待形成凝胶后将37℃的细胞悬液和培养基加入进行培养，之后通过降温释放细胞。本发明的细胞培养方法无需胰酶消化，无需细胞刮刀，能更好的保存细胞表面蛋白及标记，保证细胞高活力，是一种无损细胞培养方法。

主权项

1.一种基于温敏水凝胶材料的非胰酶消化收获细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1)聚N‑异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖大分子的制备：按重量计，将1‑20份壳聚糖、0.1‑2份酸、0.01‑8份引发剂、1‑20份N‑异丙基丙烯酰胺单体、50‑98份去离子水加入反应器中，搅拌溶解均匀后，在40‑90℃反应1‑12小时，然后使用去离子水将反应产物透析至中性，真空冻干得到聚N‑异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖粉末；2)聚N‑异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖水溶液的制备：将1‑20份1)中的聚N‑异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖粉末加入80‑99份PBS溶液中，室温下搅拌溶解均匀后得到聚N‑异丙基丙烯酰胺改性壳聚糖溶液，简称水凝胶溶液；3)非胰酶消化收获细胞培养：将细胞悬液和步骤2)制备的水凝胶溶液在较低温度下混合均匀后加入培养皿中，然后置于37℃细胞培养箱中，混合液迅速形成凝胶后加入37℃的培养基进行培养，经培养后将培养物转移到室温下降低培养温度，细胞被释放后离心分离；或者，将步骤2)制备的水凝胶溶液在较低温度下涂在培养皿底面，然后置于37℃细胞培养箱中，待形成凝胶后将37℃的细胞悬液和培养基混合溶液加入培养皿中进行培养，经培养后将培养物转移到室温下降低培养温度，细胞被释放后离心分离。