[发明专利]一种巴氏杆菌蛋白的多克隆抗体及单克隆抗体的制备

摘要

本发明公开了一种巴氏杆菌蛋白的多克隆抗体及单克隆抗体的制备，采用BCA蛋白浓度方法构建标准蛋白浓度的标准曲线，通过标准曲线计算待测toxA‑N纯化蛋白的浓度，制备抗原，再进行多杀性巴氏杆菌毒素toxA‑N蛋白多克隆抗体和单克隆抗体的制备。通过生物技术方法将纯化后的toxA‑N蛋白制备成抗原，通过对大白兔的皮下注射及昆明鼠的腹腔注射，刺激机体发生免疫应答，产生对应宿主的抗体。将制备多克隆抗体进行倍比稀释，在1:6400时P/N仍然>2，而单克隆抗体因其特异性高，稀释至1:64000时P/N依旧>2.5，完全符合制备抗体的要求。

主权项

1.一种巴氏杆菌蛋白的多克隆抗体及单克隆抗体的制备，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1，多杀性巴氏杆菌毒素toxA‑N蛋白抗原的制备：步骤1.1：待测toxA‑N纯化蛋白浓度的测定采用BCA蛋白浓度测量方法，构建标准蛋白溶液浓度的标准曲线，取实验室制备的已纯化的待测多杀性巴氏杆菌毒素toxA‑N蛋白，通过标准曲线法计算待测toxA‑N纯化蛋白的浓度；步骤1.2：抗原的制备用灭菌后的生理盐水稀释步骤1.1中已知浓度的toxA‑N蛋白，并使其终浓度为1ug/μL，将稀释后的toxA‑N蛋白按1：1的比例与相应的弗氏佐剂进行乳化，用注射器快速吹打混合，直至乳化液滴到静止的水面上不扩散为止，即乳化完全，抗原制备成功；步骤2，多杀性巴氏杆菌毒素toxA‑N蛋白多克隆抗体的制备：将步骤1制备好的抗原免疫兔子，通过三次免疫刺激机体产生相应抗体，经效价检测，获取高效价血清，并将获得的血清，经间接ELISA及Western blot进行验证；步骤3：多杀性巴氏杆菌毒素toxA‑N蛋白单克隆抗体的制备以步骤1中制备的抗原，免疫BALB/c小鼠作为饲养细胞，依次通过细胞融合、筛选、单克隆抗体鉴定获得抗体，并将获得的单克隆抗体进行鉴定。