[发明专利]一种复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法

摘要

一种复合酶催化活化桑叶提制绿原酸的方法，属于绿原酸提取技术领域。本发明以桑叶为原料，经桑叶预处理、复合酶催化活化浸提、分离纯化、冷冻干燥的简单工艺而得到产品。本发明方法使用的复合酶在水浴35℃，催化活化90min，绿原酸溶出质量可达110.08mg/L；经制备型高效液相色谱分离纯化、冷冻干燥制得高纯度绿原酸产品，其提取量为5.5042mg/g，纯度为99%。本发明方法的原料来源广，具有桑叶利用充分，制备的绿原酸产品提取率和纯度高、且生物活性完备，生产设备腐蚀小，有机溶剂使用量少，有利于环境保护等特点。本发明可广泛应用于从烟草固体废弃物中提取茄尼醇、烟碱以及果胶等天然产物，有效实现了废次烟草的资源化再利用。

主权项

1.一种复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于包括以下几个步骤：（1）将桑叶烘干，粉碎过筛 ，（2）在第（1）步预处理后的原料中，加入复合酶及乙醇水溶液、柠檬酸调整pH后放于摇床中，酶解活化后，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，收集的滤液即为桑叶粗提液，将收集的浸出液转入100mL容量瓶并用蒸馏水定容后，转入离心管后，离心得粗提离心液，最后取1mL粗提离心液于样品瓶中，通过高效液相色谱检测粗提液中绿原酸质量，（3）先将第（2）步收集的浸出离心粗提液放置于在旋转蒸发器中，进行减压浓缩得桑叶浓缩液，然后用制备型高效液相色谱处理桑叶浓缩液进一步分离纯化，得到绿原酸馏分，最后将绿原酸馏分置于旋转蒸发器中，减压浓缩得绿原酸浓缩液，（4）将第（3）步所得绿原酸浓缩液置于冰箱中冷冻后，转至真空冷冻干燥机中，干燥制得绿原酸固体单体产品，根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（1）中烘箱温度可以为50～70℃，时间可以为4～6h，筛的目数可以为20～60。