[发明专利]一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法

摘要

本发明涉及核酸检测领域，具体是一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，步骤如下：1)引物稀释；2)扩增反应；3)将反应液混匀后，放入定量PCR仪，设置65℃、30s一个循环，60个循环，循环完成后加溶解曲线分析；4)根据所获得扩增曲线和溶解曲线判定，阴性对照组的检测结果是阴性结果，则本次实验有效，否则本次实验无效。本发明具有高特异性、高灵敏度以及操作简单的优点；使用一个反应管即可检测出样本是否感染了沙门氏菌，实现了实时监控过程，并且可以针对扩增产物做溶解曲线分析，针对产物进行特异性的分析。

主权项

1.一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，其特征在于，检测是否感染沙门氏菌的快速扩增引物组，引物组包括引物1和2、引物3和4、引物5和6；引物1：ATGATCTGAGGCAAGTTGCGTTGTGAGCCATTCGTTAATGTC引物2：GCAGAATTTGCGGATCGTTGGCACCTTCATCCATCGTTAC引物3：CCTCAGCTCAATCATAACTCA引物4：ATAACTGGTATTATGGCTGCC引物5：CGTCATTGTTACCGTAATGCG引物6：AGTTCAGTGCAAGCATGCA沙门氏菌检测实验，包含以下实验材料：a)引物组：引物1和2、引物3和4、引物5和6干粉，各10D；b)反应浓缩液；c)沙门氏菌菌液：沙门氏菌攻毒实验的鸡肾、肺、肝组织；d)阳性对照为沙门氏菌DNA样本，阴性对照为不含目的基因的反应液；运用本发明核酸检测方法检测沙门氏菌的步骤如下：1)引物稀释：将试剂盒中引物1和2稀释成40uM，引物3和4稀释成5uM，引物5和6稀释成20uM，等体积混匀；2)扩增反应：反应浓缩液15ul、引物组6ul，模板、构建的标准质粒DNA4ul，设置阴性对照时，使用不含目的基因的反应液为模板；3)将反应液混匀后，放入定量PCR仪，设置65℃、30s一个循环，60个循环，循环完成后加溶解曲线分析；4)根据所获得扩增曲线和溶解曲线判定，阴性对照组的检测结果是阴性结果，则本次实验有效，否则本次实验无效。