[发明专利]一种通过叶丛芽进行兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种通过叶丛芽进行兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法。本发明采用兜兰的侧芽为外植体，采用独特的外植体切割处理和培养基进行叶丛芽的诱导、增殖和分化成正常不定芽，然后进行生根壮苗培养从而获得大量均一的组培苗。本发明的通过叶丛芽进行兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法，能成功地进行叶丛芽诱导、增殖和恢复为正常的不定芽，每团叶丛芽在半年时间内获得89‑122个不定芽，获得的不定芽经过6‑8个月的生根壮苗培养即可移栽，从而实现兜兰组培苗规模化、商品化生产。本发明的培养方法和使用的培养基成分独特且简单实惠，培养体系稳定，技术切实可行，应用价值高，为提高兜兰繁殖效率，满足兜兰市场需求提供一条有效的途径。

主权项

1.一种通过叶丛芽进行兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a、无菌不定芽的获得：切取兜兰的侧芽作为外植体，经消毒后，接种到不定芽诱导培养基中，然后加入头孢呋辛钠溶液覆盖培养基表面，培养温度25℃‑29℃，光照度1500‑2000lx，光照12‑16小时/天，获得不定芽，所述的不定芽诱导培养基为：每升含有椰子乳20‑50mL、BA 5‑10mg、蔗糖15‑20g、NaH₂PO₄ 0.17‑0.34g和琼脂4.5‑5.0g，其余为1/4‑1/2MS培养基，pH 5.8‑6.0；b、叶丛芽诱导与增殖：纵切不定芽的生长点，接种至叶丛芽诱导培养基中，培养温度25℃‑29℃，光照度1500‑2000lx，光照12‑16小时/天，直至不定芽增殖分化成叶丛芽；将叶丛芽切下来，纵切其生长点，接种至叶丛芽增殖培养基中进行叶丛芽增殖培养，培养温度25℃‑29℃，光照度1500‑2000lx，光照12‑16小时/天，叶丛芽增殖培养继代周期为60天，每次培养均将上一次培养获得的叶丛芽切割，同时纵切叶丛芽的生长点；所述的叶丛芽诱导培养基为：每升含有椰子乳150‑200mL、TDZ 0.75‑1.5mg、蔗糖20‑30g、NaH₂PO₄ 0.17‑0.34g和琼脂4.5‑5.0g，其余为1/2‑1MS培养基，pH 5.8‑6.0；所述的叶丛芽增殖培养基为：每升含有椰子乳150‑200mL、TDZ 0.25‑0.7mg、蔗糖20‑30g、NaH₂PO₄ 0.17‑0.34g和琼脂4.5‑5.0g，其余为1/2‑1MS培养基，pH 5.8‑6.0；c、叶丛芽恢复成正常的不定芽：将叶丛芽增殖培养获得的叶丛芽切割，同时纵切叶丛芽的生长点，接种至叶丛芽恢复常芽培养基中，培养温度25℃‑29℃，光照度1500‑2000lx，光照12‑16小时/天，叶丛芽增殖分化出不定芽；所述的叶丛芽恢复常芽培养基为：每升含有椰子乳25‑50mL、蔗糖10‑20g、NaH₂PO₄ 0.17‑0.34g、蛋白胨2‑4g和琼脂4.5‑5.0g，其余为1/4‑1/2MS培养基，pH 5.8‑6.0；d、不定芽的生根壮苗培养：将不定芽从成团不定芽中分离出来接种至生根壮苗培养基中，培养温度25℃‑29℃，光照度1500‑2000lx，光照12‑16小时/天，获得生根的组培苗；所述的生根壮苗培养基为：每升含有椰子乳50‑75mL、蔗糖15‑25g、NaH₂PO₄ 0.17‑0.34g、NAA 0.5‑1mg、活性炭0.3‑0.5g和琼脂4.5‑5.0g，其余为改良MS培养基，pH 5.8‑6.0；所述的改良MS培养基是将MS培养基中的NH₄NO₃和KNO₃改变为原来的1.5‑2倍，其余成份不变；e、组培苗的移栽：将组培苗移入栽培基质中培养获得兜兰种苗。