[发明专利]一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法，包括下列步骤：1)采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中6种常见病原菌的DNA；2)在含有上述细菌DNA的反应体系中，加入一种可以同时检测6种细菌特异性序列的PCR引物系统进行扩增；3)配制2％琼脂糖凝胶进行凝胶电泳，电压：120V，时间：45min，随后进行电泳紫外成像。该方法基于多重聚合酶链式反应技术，可实现同时检测大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓隐秘杆菌、乳房链球菌、奇异变形杆菌和绿脓杆菌6种细菌，较测序、单重PCR等技术操作更简便、成本更低、且有较高的灵敏度和特异性，极大的缩短了临床细菌检测鉴定周期。

主权项

1.一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法，其特征在于，具体包括下列步骤：1)细菌基因组DNA的提取：采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中的大肠埃希菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)、乳房链球菌(S.uberis)、奇异变形杆菌(P.mirabilis)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)的DNA；2)多重PCR：在含有上述细菌DNA的反应体系中，加入一种可以同时检测6种细菌特异性序列的PCR引物系统进行扩增；3)电泳紫外成像：配制2％琼脂糖凝胶进行凝胶电泳，电压：120V，时间：45min，随后进行电泳紫外成像；所述PCR引物系统包括：1)扩增大肠埃希菌(E.coli)特异性序列的引物SEQ ID No：1和SEQ ID No：2；2)扩增金黄色葡萄球菌(S.aureus)特异性序列的引物SEQ ID No：3和SEQ ID No：4；3)扩增化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)特异性序列的引物SEQ ID No：5和SEQ ID No：6；4)扩增乳房链球菌(S.uberis)特异性序列的引物SEQ ID No：7和SEQ ID No：8；5)扩增奇异变形杆菌(P.mirabilis)特异性序列的引物SEQ ID No：9和SEQ ID No：10；6)扩增铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)特异性序列的引物SEQ ID No：11和SEQ ID No：12。