[发明专利]一种治疗脑胶质瘤复合物的制备方法

摘要

本发明涉及一种治疗脑胶质瘤复合物的制备方法，该方法的步骤如下：先以肝素为载体携带cRGD肿瘤靶向肽，并通过化学酸敏腙键连接阿霉素，制得阿霉素纳米药物；然后在EDC/NHS的催化下，使所述阿霉素纳米药物上的羧基与外泌体表面的氨基偶联在一起，从而使所述阿霉素纳米药物的纳米粒密集分布在外泌体囊泡的表面。方法所制备的治疗脑胶质瘤复合物不仅可靶向肿瘤、穿越血脑屏障，而且还具有载药量高的优点。

主权项

1.一种治疗脑胶质瘤复合物的制备方法，该方法由以下步骤组成：(1)取新鲜西柚去皮榨汁，梯度离心，取沉淀物，用PBS缓冲液重悬沉淀后以蔗糖为提取剂，采用密度梯度离心法提取外泌体，负80℃冻存，备用；(2)按羧基化肝素︰肿瘤靶向环肽cRGD＝25︰3的质量比取羧基化肝素和肿瘤靶向环肽cRGD溶于二甲基亚砜中；然后以溶于二甲基亚砜中肿瘤靶向环肽cRGD的含量为基准，并按肿瘤靶向环肽cRGD︰1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺︰N‑羟基琥珀酰亚胺＝1︰1︰2.5的摩尔比加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺，室温反应12h后在去离子水中透析48h，冷冻干燥，得到Heparin‑cRGD；其中所述的肿瘤靶向环肽cRGD为c(RGDyk)；按己二酸二酰肼︰盐酸阿霉素＝3.33︰1的摩尔比称取己二酸二酰肼和盐酸阿霉素溶于甲醇，并用冰醋酸调节pH至4.5‑5.5，室温避光反应12‑16h后旋干得到ADH‑DOX，然后加入去离子水重悬，并使得ADH‑DOX在去离子水为4mg/mL，得到ADH‑DOX重悬液；取Heparin‑cRGD和ADH‑DOX重悬液混合，并使得Heparin‑cRGD在ADH‑DOX重悬液中的浓度为10mg/mL；按ADH‑DOX︰1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺＝1︰2.5的摩尔比加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺，室温避光反应6‑7h，用氢氧化钠溶液调pH至9.8，并在去离子水中透析48h，得到阿霉素纳米药物；(3)按阿霉素纳米药物中盐酸阿霉素︰外泌体＝2︰1的质量比取制得的阿霉素纳米药物和外泌体，并先将外泌体复融后与阿霉素纳米药物混合，再以阿霉素纳米药物中盐酸阿霉素的含量为基准，并按盐酸阿霉素︰1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺︰N‑羟基琥珀酰亚胺＝1︰1︰2.5的摩尔比加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺，室温避光反应12‑16h后100000g超速离心两次，每次1h；弃去上清后，冷冻干燥，即得所述的复合物。