[发明专利]单管检测一种或多种待测目标核酸序列的方法及其试剂盒

摘要

本发明提供单管检测一种或多种待测目标核酸序列的方法及其试剂盒。该方法包括针对每种待测目标核酸序列设计特异性等温扩增引物和荧光探针RNHP，每种待测目标核酸序列荧光探针RNHP标记不同的荧光；在核糖核酸酶RNaseH存在下，在核酸聚合酶的作用下等温扩增每种待测目标核酸序列；和通过不同待测目标核酸序列形成带不同荧光标记的杂交链产物，实现多个待测目标核酸序列的多重检测。本发明在等温扩增技术的基础上，只是通过引入一条特殊的修饰引物RNHP并结合RNaseH2就可实现实时多重的等温检测。

主权项

1.单管检测一种或多种待测目标核酸序列的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1：针对每种待测目标核酸序列设计特异性等温扩增引物和荧光探针RNHP，每种待测目标核酸序列荧光探针RNHP标记不同的荧光，使得不同待测目标核酸序列能够在不同荧光信号通道中区分；所述荧光探针RNHP包含至少1个RNA碱基，在所述RNA碱基左侧靠近所述探针5’端一侧的探针碱基上标记荧光基团，在所述RNA碱基靠近所述探针3’端一侧的探针碱基上标记淬灭基团；所述至少1个RNA碱基优选地为至少1个连续的RNA碱基，更优选地为1个RNA碱基；步骤2：在核糖核酸酶RNaseH存在下，在核酸聚合酶的作用下等温扩增每种待测目标核酸序列，每种荧光探针RNHP结合到相应的待测目标核酸序列上，形成探针‑目标核酸杂交双链；所述核糖核酸酶RNaseH切割探针‑目标核酸杂交双链中的RNA碱基，使得所述RNA碱基右侧的含有淬灭基团的探针片段游离出去，而在RNA碱基左侧的含有荧光基团的片段仍然保持形成杂交链且荧光基团发出荧光；和步骤3：通过待测目标核酸序列形成的带不同荧光标记的杂交链产物，实现待测目标核酸序列的检测。