[发明专利]一种高质量那屈肝素钙的制备方法

摘要

本发明涉及生物医药领域，具体说是一种高质量那屈肝素钙的制备方法。该制备方法使用肝素钠为原料，通过降解、还原、乙醇沉淀、弱阴离子交换层析分级并转钙、过滤沉淀脱水得到高质量那曲肝素钙，与现有技术相比，其分子量分布控制更精准，产品抗Xa因子/抗Ⅱa因子效价比更高，操作更简便，收率更高，适于工业化生产。

主权项

1.一种高质量那屈肝素钙的制备方法，其特征在于包括以下步骤：第一步，肝素钠的裂解用纯水将肝素钠固体原料制成质量浓度为9‑11%的肝素溶液，用盐酸溶液调pH值至2.5‑3.0；向肝素溶液中滴加质量浓度为35%‑40%的亚硝酸钠溶液，亚硝酸钠与肝素钠的固体质量比为（28‑32g）:1000g，控制温度在23‑25℃，搅拌反应1.5‑2.5h，再用氧化钙调pH值至8.5‑9.0终止裂解反应；第二步，裂解液的还原向裂解液中加入硼氢化钠，硼氢化钠加入量与初始肝素钠的固体质量比为（10‑15g）:1000g，控制温度在30‑40℃，反应2‑4h后降温至20℃以下；用盐酸调整pH值至2.5‑3.0，搅拌反应15‑20min后，再用氢氧化钠调整pH值至6.5‑7.0，将该溶液流过紫外灯照射管，以220‑254nm波长照射20‑30min；第三步，乙醇沉淀向第二步结束后的料液中边搅拌边加入相当于1.5‑2倍料液体积的95%乙醇，搅拌15‑20min后静置12‑18h，然后倒去上清液；用95%乙醇洗涤沉淀2‑3次，静置去除乙醇上清，得到固态的晶体颗粒沉淀；第四步，弱阴离子交换层析分级并转钙将第三步得到的晶体颗粒用纯水溶解成浓度为3‑5%的料液，调节料液pH值至6.5‑7.5；弱阴离子交换层析柱用0.01‑0.05 mol/L的Tris‑HCl缓冲液平衡，检测波长232nm，平衡稳定后，将料液按30‑35mg肝素/ml介质上样；上样结束后，用0.10‑0.15 mol/L的氯化钙溶液进行洗涤，再以0.5‑1.0 mol/L氯化钙溶液进行洗脱，根据232nm紫外信号收集洗脱液；第五步，过滤、沉淀和脱水将第四步收集的洗脱液通过0.22um除菌滤膜过滤，滤液中加入相当于2‑3倍滤液体积的95%乙醇，搅拌10‑15min，静置8‑12h后去除乙醇上清液；再用无水乙醇洗涤沉淀2‑3次，沉淀离心脱水，55‑60℃真空干燥48~56h得到那屈肝素钙。