[发明专利]一种香橼叶肉原生质体的分离方法有效
| 申请号： | 201910195356.8 | 申请日： | 2019-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN109777764B | 公开（公告）日： | 2022-10-21 |
| 发明（设计）人： | 张艳芳;温寿星;赵维峰;杨文秀 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院果树研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种香橼叶肉原生质体的分离方法，包括以下步骤：取香橼实生苗的幼嫩叶片进行预质壁分离处理、酶解、加入CPW洗液纯化，即可收集得到纯化后的原生质体沉淀。本发明可获得高活性、高产量的原生质体，为开展香橼原生质体胞融合、遗传转化等研究提供实验材料，为香橼实生选种提供新途径。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 香橼 叶肉 原生 质体 分离 方法 | ||
【主权项】：
1.一种香橼叶肉原生质体的分离方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）实生苗获得：选择充分成熟、无病虫害的果实，取出种子，用50℃热水浸种30min，再用冷水浸泡12h，然后用300倍的40wt%福尔马林浸种1～2h，捞出，晾干至种子手摸不发黏，立即播种；（2）叶片处理：取刚展开的实生苗幼嫩叶片，用蒸馏水洗净，晾干，暗处理1天；去除主脉，切成宽1mm的细条；（3）预质壁分离：将切好的细条置于5wt%甘露醇溶液中浸泡1h；（4）酶解：将于甘露醇溶液中浸泡后的细条置于酶解液中，在25℃、黑暗条件下于40 r/min的摇床上酶解2～3h；（5）纯化：酶解后将溶液用孔径425μm的滤网过滤，滤液以500 r/min离心10min，去除上清液，用13%CPW洗液将沉淀的原生质体小球悬浮，离心5min，用吸管收集下层原生质体。
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