[发明专利]一种GII.4型诺如病毒广谱单克隆抗体的制备方法及用途

摘要

一种GII.4型诺如病毒广谱单克隆抗体的制备方法及在作为检测NoV抗原或NoV的IgG或IgM试剂盒的用途，制备包括1)，免疫原的制备，扩增或设计合成P序列，构建PGEX‑4T‑1‑P重组表达载体，利用大肠杆菌表达系统表达NoVGⅡ.4型P蛋白，经GST亲和层析柱纯化，制备P颗粒；2)，动物免疫，3)杂交瘤细胞株的制备和筛选，将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞通过PEG1500融合，制备杂交瘤细胞；通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清以筛选特GⅡ.4型诺如病毒的抗体；4)杂交瘤细胞的克隆化。本发明制备的抗NoV单克隆抗体具有针对NoV特异性强，敏感性高，稳定，适合用于制备NoV检测试剂盒。

主权项

1.一种GII.4型诺如病毒广谱单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)，免疫原的制备，具体是：扩增或设计合成P序列，构建PGEX‑4T‑1‑P重组表达载体，利用大肠杆菌表达系统表达NoVGⅡ.4型P蛋白，经GST亲和层析柱纯化，制备P颗粒；2)，动物免疫，具体是：取6‑8周龄雌性BALB/c小鼠，将NoV96簇、2004簇、2006b簇和2010簇4种GⅡ.4型NoV P颗粒等比例混合，再与等体积的弗式完全佐剂混合并乳化，在小鼠颈背部皮下多点免疫，免疫量为60ug/只；间隔14天后，用等量的复合抗原伴有弗氏不完全佐剂进行加强免疫，免疫量为30ug/只，共进行5次加强免疫，以60ug/只的免疫量冲击免疫3天后取免疫小鼠脾脏细胞用于制备杂交瘤细胞；3)杂交瘤细胞株的制备和筛选，具体是：将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞通过PEG1500融合，制备杂交瘤细胞；七天之后，通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清以筛选特异性针对GⅡ.4型诺如病毒的抗体；4)杂交瘤细胞的克隆化，具体是：采用有限稀释法对阳性孔的细胞进行克隆，连续克隆培养多次，直至克隆孔内抗体检测100％阳性为止，扩大培养阳性细胞株，冻存。