[发明专利]ATP生物荧光lgCB-lgIB标曲法检测抗菌硅/橡胶抗细菌性能的方法

摘要

本发明涉及一种抗菌硅/橡胶抗细菌性能检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；OD值‑活菌含量对数值lgC_B标曲建立及接种菌液C_B标定；lgC_B‑相对荧光强度对数值lgI_B标曲建立；样品接种、培养及洗脱回收；回收液I_B测定及其活菌含量C_B和T_B推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的硅/橡胶抗细菌性能进行精准定量测试。本发明规定洗脱回收接触0h及培养24h后对照样品和抗菌样品，测定回收活菌I_B并以lgI_B表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的硅/橡胶抗细菌性能检测的ATP生物荧光lgC_B‑lgI_B标曲法，将以先进检测技术支撑产品质量提升。

主权项

1.一种抗菌硅/橡胶抗细菌性能的检测方法，包括：(1)样品制备及前处理；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)OD值‑活菌含量对数值lgC_B标准曲线建立及接种菌液C_B标定；(5)活菌含量对数值lgC_B‑相对荧光强度对数值lgI_B标准曲线建立；(6)样品接种、培养及洗脱回收；(7)回收液相对荧光强度值I_B测定；(8)回收液活菌含量C_B和T_B推算及抗菌率R和抗菌活性值A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌硅/橡胶材料及制品抗细菌性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgC_B‑lgI_B标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值I_B测定中：明确对照样品和抗菌样品的数量、尺寸及前处理要求，将试验标准菌株进行传代、活化后，取连续转接2次的新鲜细菌培养物制备菌悬液，应用MTT比色分析法进行活菌计数，建立OD值‑活菌含量对数值lgC_B标准曲线，推导得出曲线的线性方程式Y＝a₀X+b₀及相关系数R₀²；并对接种菌液进行活菌含量C_B标定：5.0×10⁶CFU/mL～9.0×10⁶CFU/mL，同时，选择C_B为4.2×10³CFU/mL、4.2×10⁴CFU/mL、4.2×10⁵CFU/mL的稀释液作为标准系列菌悬液；测定其相对荧光强度值I_B，绘制lgC_B‑lgI_B标准曲线，并推导得出曲线的线性方程式Y＝a_BX+b_B及相关系数R_B²，然后，向各组对照样品和抗菌样品待测表面分别滴加0.3mL菌液；立即用4.7mL洗脱液对6组0h接触样品进行洗脱回收，应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值I_BC0ij、I_BT0ij，根据曲线方程式Y＝a_BX+b_B推算其活菌含量C_BOij和T_BOij，同时，将另外6组24h接触样品密封于无菌平皿内，(37±1)℃、(90±2)％RH培养24h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式回收表面残留菌并测定回收液的相对荧光强度值I_BCtij、I_BTtij，推算相应的活菌含量C_Btij和T_Btij；在抗菌率R及抗菌活性值A计算中：根据试验菌种标准曲线lgC_B‑lgI_B的线性方程式Y＝a_BX+b_B，以0h接触及24h培养后每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经24h培养后的细菌增长值F_ij、G_ij以及抗菌率R_ij和抗菌活性值A_ij；对每组样品的R_ij和A_ij取算术平均值得到相应的R_i和A_i；每批抗菌硅/橡胶样品的抗菌率R和抗菌活性值A为其3组样品R_i和A_i的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：当某组(件)抗菌硅/橡胶样品的抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A_i(A_ij)与其他两组(四件)样品的抗细菌性能相比至少相差一个水平级时，重新提取一组(件)样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgC_B─lgI_B标准曲线法测得的抗菌率或抗菌活性值，如果前后两组(件)抗菌硅/橡胶样品抗细菌性能水平相同，则弃之；取另外两组(四件)剩余样品抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A_i(A_ij)的算术平均值作为该批次(组)抗菌硅/橡胶样品抗细菌性能的评价结果。