[发明专利]一种利用人胚肾上皮细胞重组表达Lp-PLA2的工艺方法在审
| 申请号： | 201910201825.2 | 申请日： | 2019-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN109837260A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 戴瞻 | 申请（专利权）人： | 南京欧凯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/85;C12N15/55 |
| 代理公司： | 北京挺立专利事务所(普通合伙) 11265 | 代理人： | 倪钜芳 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江北新区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种利用人胚肾上皮细胞重组表达磷脂酶A2（Lp‑PLA2）的工艺方法，包括以下步骤：首先将Lp‑PLA2基因片段采用密码子优化软件进行优化，通过PCR合成Lp‑PLA2基因片段，然后将合成的基因片段插入到表达载体中，构建Lp‑PLA2表达质粒，利用转染试剂介导Lp‑PLA2表达质粒转入人胚肾细胞（HEK293）中，从而瞬时表达可溶性Lp‑PLA2蛋白，最后通过亲和层析方法提取获得重组表达的Lp‑PLA2蛋白。本发明提供的方法可获得具有翻译后修饰的生物功能活性Lp‑PLA2蛋白，同时提高Lp‑PLA2在人胚肾细胞（HEK293）中表达产量，这对于Lp‑PLA2蛋白的功能研究和免疫诊断试剂盒开发带来了很好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 基因片段 重组表达 蛋白 人胚肾细胞 表达质粒 上皮细胞 人胚肾 合成 免疫诊断试剂盒 翻译后修饰 密码子优化 表达载体 方法提取 功能研究 亲和层析 生物功能 瞬时表达 转染试剂 磷脂酶 构建 介导 转入 优化 应用 开发 | ||
【主权项】：
1.一种利用人胚肾上皮细胞重组表达Lp‑PLA2的工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）对Lp‑PLA2基因片段进行密码子优化；（2）构建表达质粒：合成步骤（1）优化后基因片段，连接到表达载体上，获得Lp‑PLA2表达质粒；（3）将步骤（2）中表达质粒通过转染试剂介导，转染入人胚肾上皮细胞HEK293中，进行细胞培养和Lp‑PLA2蛋白瞬时表达；（4）收集步骤（3）中分泌表达Lp‑PLA2蛋白细胞培养基，进行分离纯化获得Lp‑PLA2蛋白。
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