[发明专利]LDLR突变体的外泌体及制备方法与制备高脂血症药物的应用在审
| 申请号： | 201910207151.7 | 申请日： | 2019-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN110016482A | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 凃欣;周颖超;谢强 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N5/10;A61K35/407;A61P3/06 |
| 代理公司： | 华中科技大学专利中心 42201 | 代理人： | 孙杨柳;曹葆青 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种LDLR突变体的外泌体及制备方法与制备高脂血症药物的应用，涉及治疗血脂异常药物技术领域。制备方法为将肝细胞接种在含有胎牛血清的培养基中，将过表达低密度脂蛋白受体基因突变体的腺病毒转染肝细胞；突变体为低密度脂蛋白受体基因氧连接糖链结构域单碱基突变导致的终止突变；转染后，更换无血清培养基继续培养，再收集上清液；将所述上清液进行离心，去除漂浮活细胞，即得到含有外泌体的上清液；再进行分离纯化，得到过表达低密度脂蛋白受体基因突变体的细胞外泌体。本发明所述外泌体为内源细胞产生的天然载体，以外泌体作为转运载体，具有免疫源性低、运输效率高、稳定性好和靶向性强以及能跨越血脑屏障等独特优势。 | ||
| 搜索关键词： | 突变体 制备 低密度脂蛋白受体基因 上清液 高脂血症药物 肝细胞 转染 无血清培养基 药物技术领域 单碱基突变 独特优势 分离纯化 免疫源性 内源细胞 胎牛血清 糖链结构 天然载体 血脑屏障 血脂异常 运输效率 转运载体 培养基 靶向性 活细胞 腺病毒 氧连接 去除 接种 突变 应用 漂浮 细胞 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种过表达低密度脂蛋白受体基因突变体的细胞外泌体的制备方法，其特征在于，含有以下步骤：(1)将肝细胞接种在含有胎牛血清的培养基中培养，将过表达低密度脂蛋白受体基因突变体的腺病毒转染所述肝细胞；所述突变体为低密度脂蛋白受体基因氧连接糖链结构域单碱基突变导致的终止突变；(2)待步骤(1)所述转染6h‑8h后，更换无血清培养基继续培养48h‑72h，再收集上清液；将所述上清液进行离心，去除漂浮活细胞，即得到含有外泌体的上清液；(3)将步骤(2)得到的含有外泌体的上清液进行分离纯化，得到过表达低密度脂蛋白受体基因突变体的细胞外泌体。
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