[发明专利]一种糖蛋白多种电荷异构体N糖链结构的评价方法

摘要

本发明公开了一种糖蛋白多种电荷异构体N糖链结构的评价方法。该方法包括以下步骤：电荷异质体分离、电荷异质体收集、胶内酶切、糖链富集、糖链标记、糖链纯化、质谱分析。本发明发现等电聚焦电泳（IEF）分离多种电荷异构体及胶内酶切的手段用于分析N糖链结构的，克服了多种电荷异构体对N糖链结构分析的难点，能够精确分析单一电荷糖蛋白的N糖链结构，更有利于对多种电荷异构体N糖结构进行精确分析，适用于糖蛋白多种电荷异质体N糖链结构的分析与评价。

主权项

1.一种糖蛋白多种电荷异构体N糖链结构的评价方法，该方法包括以下步骤：（1）电荷异质体分离：通过等电聚焦电泳将多种电荷异质体进行分离，对电泳后的凝胶进行固定并染色；（2）电荷异质体收集：对分离后的多种电荷异质体条带编号，切割并收集到离心管中；（3）胶内酶切：将收集后的多个凝胶条带样品脱色，再进行还原和烷基化处理，最后使用糖苷酶F进行胶内酶切；（4）糖链富集：酶切完毕后，提取胶内酶切后的糖链，使用有机溶剂对溶液中的蛋白进行沉淀，收集上清液并干燥，富集糖链；（5）糖链标记：使用甲酸处理富集的糖链并进行干燥，然后对干燥的糖链使用2‑氨基苯甲酰胺（2‑AB）进行荧光标记；（6）糖链纯化：使用N糖纯化小柱对标记的糖链进行纯化，收集标记糖链；（7）质谱分析：对标记后的糖链进行荧光质谱分析，确认N糖链结构。