[发明专利]幽门螺旋杆菌cagA基因失活突变株的构建方法

摘要

本申请涉及基因工程技术领域，具体公开了幽门螺旋杆菌cagA基因失活突变株的构建方法，包括如下步骤：(1)刮取生长于哥伦比亚琼脂的H.Pylori 11639菌体加入电转化缓冲液中，稀释至H.Pylori 11639菌体的浓度为10¹²个/L，获得溶液A；(2)取100μL溶液A加入冰冷的0.2cm BioRed电转杯中，并加入pHG1打靶载体50μg；(3)将电转杯放置在取液装置下方的冰块上；(4)向SOC培养基储箱中加入足量的SOC培养基，将取液管伸入电转杯；(5)将哥伦比亚血平板与筒体固定，并使涂刷与哥伦比亚血平板的表面接触，在控制器上输入启动时间为10～15min；(6)完成对哥伦比亚血平板涂刷后，取下哥伦比亚血平板。通过应用取液装置，可以减少人工操作带来的误差并提高效率。

主权项

1.幽门螺旋杆菌cagA基因失活突变株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：步骤(1)：刮取生长于哥伦比亚琼脂的H.Pylori11639菌体加入电转化缓冲液中，稀释至H.Pylori11639菌体的浓度为10¹²个/L，获得溶液A；步骤(2)：取100μL溶液A加入冰冷的0.2cm BioRed电转杯中，并加入pHG1打靶载体50μg；步骤(3)：将电转杯放置在取液装置下方的冰块上；取液装置包括驱动电机、取液机构、SOC培养基储箱、涂刷以及控制驱动电机启动及BioRed Gene pluser接通电源的控制器；取液机构包括轴向沿竖直方向布置的筒体，筒体内设有转动轴，转动轴的上端通过气动离合器与驱动电机的输出轴连接；筒体的中部设于隔板，筒体的底部与隔板之间设有从上至下依次布置的第一磁性活塞和第二磁性活塞，第一磁性活塞和第二磁性活塞的相对端的磁极相反；隔板与第一磁性活塞之间为气腔，第二磁性活塞与筒体底部之间为吸液腔，转动轴转动将带动第一磁性活塞往复运动；第一磁性活塞不断往复运动可形成压缩气体控制气动离合器分离，第二磁性活塞往复滑动可将SOC培养基储箱内的SOC培养基排出；隔板的上方设有仅能沿筒体轴向往复滑动的第三活塞，第三活塞与隔板之间构成取液腔，转动轴与第三活塞螺纹连接，且转动轴通过发条与筒体连接；筒体上设有与取液腔连通的取液管，涂刷与第三活塞固定连接，第三活塞往复运动可通过取液管吸入液体并将液体排至涂刷上；第二磁性活塞上设有一个为平面的侧面，侧面上设有球面凹槽和过渡槽，过渡槽的深度大于球面凹槽的深度，过渡槽的下端延伸至第二磁性活塞的下表面；球面凹槽与过渡槽通过导向槽连通；筒体上滑动连接有启动块，并设有与启动块连接的复位弹簧，启动块上设有可伸缩的限位杆，限位杆可与球面凹槽、过渡槽和导向槽形成配合；步骤(4)：向SOC培养基储箱中加入足量的SOC培养基，将取液管伸入电转杯；步骤(5)：将哥伦比亚血平板与筒体固定，并使涂刷与哥伦比亚血平板的表面接触，在控制器上输入启动时间为10～15min；步骤(6)：完成对哥伦比亚血平板涂刷后，取下哥伦比亚血平板。